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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵罐小试问题
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:05:13
你的培养基中前期可以单独加一点葡萄糖 和 蛋白胨或者硫酸铵，蛋白胨直接发酵罐灭菌，葡萄糖自己那个单独的瓶子 配成水溶液（这个没太多要求，溶解了就可以 115℃灭菌20分钟），就是让细菌首先利用速效碳源和氮源先生长起来，再利用慢速碳源 玉米浆，玉米浆组要提供碳源，如果对补加多少氮源没数，可以将氮源配成溶液用补料瓶慢慢流加，细菌应该不难长
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21楼2012-10-19 13:25:27
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

有溶氧电极的话，你的溶氧可以设定在15%-20%之间就可以了，太高了浪费了。
不过后期基本上都是最大通气 最大转速了
工业大规模生产氮源可选用豆粕或者硫酸铵，自己小罐子实验可以选用蛋白胨
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22楼2012-10-19 13:28:54
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by potential8707 at 2012-10-19 10:31:04
培养基配方：玉米浆3.3%，KH2PO4 0.17%，MgSO4 0.033%，富马酸 0.83%，NaCl 0.2%，接种量 0.033%，有加消泡剂，罐体是玻璃的,pH7.0，温度40-42℃，没有补料，这些都是大罐上的，我照做的，只是把风量和转数提高了...

1、你的磷酸盐含量太低(只有1.7g/L)，尽管玉米浆这个东东可以提供一些磷酸盐，但是如果补料中没有磷酸盐的话，菌体密度高不起来；
2、你最好用一些酸性蛋白酶把玉米浆处理一下，否则利用率太低了；
3、硫酸镁量低，相当于0.3g/L，比较贫瘠的M9培养基里面都比这个高；
4、接种量有些少……
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我笃信:人定胜天！
23楼2012-10-19 14:15:44
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

培养基中的玉米浆可以提供氮源，但是如果不水解的话就有限了……
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我笃信:人定胜天！
24楼2012-10-19 14:17:33
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wind_king85

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小罐、大罐条件是不一样的，个人觉得，你的转速偏小、风量过大，另外需结合溶氧指标。不知道你的周期多久，OD好像不高。
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25楼2012-10-20 14:17:34
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potential8707

木虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:09:05
我不会跟你扯什么公式，根据经验，大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以，初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300，通气适当小点设个2L就可以了，后期根据生长需要慢慢隔1-2小 ...

好的，谢谢，我明天按你说的做下看下结果
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26楼2012-10-21 16:07:17
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potential8707

木虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:09:05
我不会跟你扯什么公式，根据经验，大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以，初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300，通气适当小点设个2L就可以了，后期根据生长需要慢慢隔1-2小 ...

好的，谢谢，我明天按你说的做下看下结果
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27楼2012-10-21 16:07:23
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:20:53
看了你的培养基配方了，接种量太少了，发酵罐一般5%-10%接种，0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵，会不会是因为大罐的散热系统做的不好，一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆，你怎 ...

培养基pH为3.3左右，之后是用氨水将pH调至7.0的，这样是不是还是不够啊，我再添加些蛋白胨试试
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28楼2012-10-21 16:12:30
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:25:27
你的培养基中前期可以单独加一点葡萄糖 和 蛋白胨或者硫酸铵，蛋白胨直接发酵罐灭菌，葡萄糖自己那个单独的瓶子 配成水溶液（这个没太多要求，溶解了就可以 115℃灭菌20分钟），就是让细菌首先利用速效碳源和氮源先 ...

好的，我试试，谢谢哦
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29楼2012-10-21 16:14:48
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
23楼: Originally posted by hanjun80 at 2012-10-19 14:15:44
1、你的磷酸盐含量太低(只有1.7g/L)，尽管玉米浆这个东东可以提供一些磷酸盐，但是如果补料中没有磷酸盐的话，菌体密度高不起来；
2、你最好用一些酸性蛋白酶把玉米浆处理一下，否则利用率太低了；
3、硫酸镁量低 ...

总得来说就是营养成分不够.......我把量加大些试试看
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30楼2012-10-21 16:16:44
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