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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖


zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:05:13
你的培养基中前期可以单独加一点葡萄糖 和 蛋白胨或者硫酸铵,蛋白胨直接发酵罐灭菌,葡萄糖自己那个单独的瓶子 配成水溶液(这个没太多要求,溶解了就可以 115℃灭菌20分钟),就是让细菌首先利用速效碳源和氮源先生长起来,再利用慢速碳源 玉米浆,玉米浆组要提供碳源,如果对补加多少氮源没数,可以将氮源配成溶液用补料瓶慢慢流加,细菌应该不难长
21楼2012-10-19 13:25:27
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

有溶氧电极的话,你的溶氧可以设定在15%-20%之间就可以了,太高了浪费了。
不过后期基本上都是最大通气 最大转速了
工业大规模生产氮源可选用豆粕或者硫酸铵,自己小罐子实验可以选用蛋白胨
22楼2012-10-19 13:28:54
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by potential8707 at 2012-10-19 10:31:04
培养基配方:玉米浆3.3%,KH2PO4 0.17%,MgSO4 0.033%,富马酸 0.83%,NaCl 0.2%,接种量 0.033%,有加消泡剂,罐体是玻璃的,pH7.0,温度40-42℃,没有补料,这些都是大罐上的,我照做的,只是把风量和转数提高了...

1、你的磷酸盐含量太低(只有1.7g/L),尽管玉米浆这个东东可以提供一些磷酸盐,但是如果补料中没有磷酸盐的话,菌体密度高不起来;
2、你最好用一些酸性蛋白酶把玉米浆处理一下,否则利用率太低了;
3、硫酸镁量低,相当于0.3g/L,比较贫瘠的M9培养基里面都比这个高;
4、接种量有些少……
我笃信:人定胜天!
23楼2012-10-19 14:15:44
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

培养基中的玉米浆可以提供氮源,但是如果不水解的话就有限了……
我笃信:人定胜天!
24楼2012-10-19 14:17:33
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wind_king85

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小罐、大罐条件是不一样的,个人觉得,你的转速偏小、风量过大,另外需结合溶氧指标。不知道你的周期多久,OD好像不高。
25楼2012-10-20 14:17:34
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potential8707

木虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:09:05
我不会跟你扯什么公式,根据经验,大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以,初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300,通气适当小点设个2L就可以了,后期根据生长需要慢慢隔1-2小 ...

好的,谢谢,我明天按你说的做下看下结果
26楼2012-10-21 16:07:17
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potential8707

木虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:09:05
我不会跟你扯什么公式,根据经验,大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以,初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300,通气适当小点设个2L就可以了,后期根据生长需要慢慢隔1-2小 ...

好的,谢谢,我明天按你说的做下看下结果
27楼2012-10-21 16:07:23
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potential8707

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
20楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:20:53
看了你的培养基配方了,接种量太少了,发酵罐一般5%-10%接种,0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵,会不会是因为大罐的散热系统做的不好,一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆,你怎 ...

培养基pH为3.3左右,之后是用氨水将pH调至7.0的,这样是不是还是不够啊,我再添加些蛋白胨试试
28楼2012-10-21 16:12:30
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potential8707

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:25:27
你的培养基中前期可以单独加一点葡萄糖 和 蛋白胨或者硫酸铵,蛋白胨直接发酵罐灭菌,葡萄糖自己那个单独的瓶子 配成水溶液(这个没太多要求,溶解了就可以 115℃灭菌20分钟),就是让细菌首先利用速效碳源和氮源先 ...

好的,我试试,谢谢哦
29楼2012-10-21 16:14:48
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potential8707

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
23楼: Originally posted by hanjun80 at 2012-10-19 14:15:44
1、你的磷酸盐含量太低(只有1.7g/L),尽管玉米浆这个东东可以提供一些磷酸盐,但是如果补料中没有磷酸盐的话,菌体密度高不起来;
2、你最好用一些酸性蛋白酶把玉米浆处理一下,否则利用率太低了;
3、硫酸镁量低 ...

总得来说就是营养成分不够.......我把量加大些试试看
30楼2012-10-21 16:16:44
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