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potential8707

木虫 (初入文坛)

[求助] 发酵罐小试问题

我做的是大肠杆菌的发酵罐,单位里的大罐已经在生产了,让我做5L的小罐,我也是第一次做,但总是做不到生产上的要求,想在这求助下。
生产上最后发酵液的pH在8.0以上,OD在5.5以上,可我现在将接种量提高了两倍,转数为250 rpm,风量10 SCFH(1 L/min=2.12 SCFH),最后发酵结束后,pH能达标,但是OD远远不行,想问下是不是风量太大了,我下面要怎么改善啊
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木虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by wzq_ing at 2012-10-16 12:56:26
小罐和大罐是有区别的,
你的大罐条件是什么样的??
一般情况小罐的转速和风量应该是要比大罐高一些
关系到溶氧问题和保温稳定等情况

大罐的转数40rpm,风量400m3/h,我已经提高很多了。溶氧开始在百分之七八十,之后会下降,温度用的跟大罐一样的,41℃。
4楼2012-10-16 15:21:59
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木虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2012-10-16 14:30:41
接种量并不是越大越好,有时候菌体量太大反而会抑制菌体生长,保持原样试试。

之前试过,结果连pH也没能达标,pH最高升到7.5-7.6,之后就升不上去了。
5楼2012-10-16 15:22:57
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木虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by jimmyp at 2012-10-16 19:20:34
加大氮源试试

是不是因为我加大了接种量,营养不够了呀
7楼2012-10-16 20:54:10
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木虫 (初入文坛)

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10楼: Originally posted by hanjun80 at 2012-10-17 15:29:29
1、你的培养基配方?
2、你的培养工艺?包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
有了上述两个东东,才能给你确切的建议,只有问题,没法回答……

培养基配方:玉米浆3.3%,KH2PO4 0.17%,MgSO4 0.033%,富马酸 0.83%,NaCl 0.2%,接种量 0.033%,有加消泡剂,罐体是玻璃的,pH7.0,温度40-42℃,没有补料,这些都是大罐上的,我照做的,只是把风量和转数提高了
14楼2012-10-19 10:31:04
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木虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by wzq_ing at 2012-10-17 08:37:16
既然知道溶氧,把小罐的溶氧调到和大罐一样,转速风量都增加,但不能只增加一个,因为还要考虑菌承受的剪切力情况,剪切力过大也不利于生长,还有罐压要考虑,跟大罐保持一致,
楼主考虑下六楼说的情况,增加氮源 ...

大罐上没有溶氧电极......转数风量两个都增加了的,我刚做了加大氮源的,结果比以前要稍微好些
15楼2012-10-19 10:33:37
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木虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-17 10:42:45
溶氧达不到,pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转(大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题,小罐不存在这个问题),不过不知道你的培养基是什么,防止起泡,要不时加消泡剂,通气量每分钟和发酵 ...

培养基配方见下面的回答,灭菌前就在培养基里加消泡剂了。发酵液体积为3L,通气量设定的为5L/min,会不会大了?昨天将转数提到300rpm,结果比以前稍微好些,可OD还是不达标,罐体是玻璃的。我想着是不是培养基配方就有问题啊
16楼2012-10-19 10:38:01
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木虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
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19楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:09:05
我不会跟你扯什么公式,根据经验,大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以,初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300,通气适当小点设个2L就可以了,后期根据生长需要慢慢隔1-2小 ...

好的,谢谢,我明天按你说的做下看下结果
26楼2012-10-21 16:07:17
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木虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
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19楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:09:05
我不会跟你扯什么公式,根据经验,大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以,初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300,通气适当小点设个2L就可以了,后期根据生长需要慢慢隔1-2小 ...

好的,谢谢,我明天按你说的做下看下结果
27楼2012-10-21 16:07:23
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木虫 (初入文坛)

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20楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-19 13:20:53
看了你的培养基配方了,接种量太少了,发酵罐一般5%-10%接种,0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵,会不会是因为大罐的散热系统做的不好,一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆,你怎 ...

培养基pH为3.3左右,之后是用氨水将pH调至7.0的,这样是不是还是不够啊,我再添加些蛋白胨试试
28楼2012-10-21 16:12:30
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