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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵罐染菌问题
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cheauyn

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 发酵罐染菌问题

现在在做一项目，一上罐子就染菌，摇瓶一点问题都没有。5L，7L，30L都试过，每个罐子都染。由于培养基灭菌不透彻，里面最有可能的就是5%的黄豆饼粉(其他的都单独试过，没有问题)，想请各位大侠帮帮忙，这种问题怎么解决啊？~~~急~~~急
      另，
    1） 已试过将黄豆饼粉单独在灭菌前煮沸1-2h，发酵后期仍有染菌现象；
    2）黄豆饼粉水解后过滤，可解决，但是菌种生长受到限制。
    不知各位是否有更好的办法解决？
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erbaomama

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1楼2011-11-29 12:37:47
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thiophene9859

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
cheauyn(金币+2): 谢谢！ 2011-11-30 10:17:58
zhang8826857(金币+1): 写了这么多，奖励热心虫子 2011-11-30 11:15:47
一般来说黄豆粉不存在灭菌不透的问题，如果怀疑黄豆粉，摇瓶实验有没有添加黄豆粉？摇瓶实验要是添加了黄豆粉没有染，就说明不是黄豆粉的问题。检验摇瓶种子有没有染菌显微镜检测在杂菌浓度低的时候不可靠，建议采用平板涂布。
如果种子没有问题，罐体密封性没有问题。做个设备验证，在发酵罐中随便加点葡萄糖、蛋白胨，灭菌后不接种，通气，如果还染菌就说明是空气系统的问题。如果空气系统有问题，空压机是否定期排水？油水分离器是否良好工作，都没有问题尝试更换空气过滤器，小罐过滤器便宜，几十块一个。
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7楼2011-11-30 09:10:16
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kissyls

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
cheauyn(金币+2): 很有道理，罐子应该没有问题。过滤器，滤芯全都换过新的，而且之前也做过其他的菌种，没有问题。感觉问题可能出在黄豆饼粉上。 2011-12-01 08:36:44
zhang8826857(金币+1): 鼓励热心虫子 2011-12-01 09:23:23
一般来说你这种情况，发酵前期、中期都有污染。
前期污染：①有可能空气系统有问题、②设备有问题（发酵罐或者管道存在死角，灭菌灭不到)、③培养基灭菌不彻底。
中期污染：最大可能性就是黄豆粉存在结块，黄豆粉小疙瘩灭不透。
建议你不要盲目上罐，彻底清查出染菌原因，你已经做过摇瓶验证种子应该没问题。建议你仔细检查下发酵设备，发酵罐看看有没有死角，空气过滤系统是否完善，过滤器、滤芯都要检查，培养基当中的黄豆粉，在上罐前用水浸泡，浸泡个1到2小时，在搅拌，做到黄豆粉不结块。这些都弄好，做1—2次空白培养，12h、24、36看看效果，是否染菌。空白培养做到不染菌在上菌种培养，在上罐中做下摇瓶同步培养验证。
个人已经仅供参考
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我像只鱼儿在你的荷塘,只为和你守候那皎白月光.游过了四季荷花依然香,等你宛在水中央.
9楼2011-11-30 12:44:37
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普通回帖

donng

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

cheauyn(金币+2): 谢谢！其实这也试过，不过效果不是很理想，而且考虑到以后如果放大生产，这也不是个长久之计。现在灭菌都已经温度更高了，时间基本都是在30min以上之45min，可仍旧存在染菌问题，头大了~~~ 2011-11-29 14:45:57
将黄豆饼粉单独灭菌，发酵前和种子一起加进去。罐按照121度，20min灭菌，也可以在灭罐之前给发酵罐空灭一次，温度可以高一点，时间长一点。
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2楼2011-11-29 14:40:11
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kissyls

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

cheauyn(金币+1): 发酵前，发酵中都会有染菌现象 2011-11-30 08:33:40
染菌，问下是发酵前染菌，还是说发酵中期染菌？这个很重要
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3楼2011-11-29 22:41:24
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yujiuxi

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

cheauyn(金币+1): 这是必然的，可是不能每个罐子都染菌啊？ 2011-11-30 08:37:49
给罐体通无菌空气，让罐体处于正压状态GG
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赚钱娶媳妇
4楼2011-11-30 07:05:00
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newtime007

木虫 (正式写手)

成长的微生物

【答案】应助回帖

cheauyn(金币+2): 请问，这种发酵用的黄豆饼的浓度是多少？之前用的黄豆饼是比较粗的，回来自己又粉碎了下，过了30目的筛子，放在罐子里就染菌。现在换了很细的，效果也不好。 2011-11-30 08:35:51
引用回帖:
4楼: Originally posted by yujiuxi at 2011-11-30 07:05:00:
给罐体通无菌空气，让罐体处于正压状态GG

如果仅是黄豆饼粉引起，可以将黄豆饼粉的粒度做细点，如150目以上。不过你说的这种情况很少见，有人作过黄豆饼不用粉碎的发酵，且效果很好
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上善若水，水善利万物而不争
5楼2011-11-30 08:30:30
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valley15

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

cheauyn(金币+1): 在猜测应该是罐子灭菌不彻底，灭菌时间提高到了40min,都还不行。请问有没有更好的方法了？ 2011-11-30 08:39:46
是不是发酵罐灭菌不彻底？空灭时间加长，另检空气系统。
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6楼2011-11-30 08:35:32
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thiophene9859

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

cheauyn(金币+1): 谢谢，换过了 2011-11-30 10:18:12
黄豆粉要是真的像你说的那样难以消透的话，说明你的原材料收到了污染，建议更换黄豆饼粉
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8楼2011-11-30 09:12:03
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icebergwu

木虫之王 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
cheauyn(金币+1): 用水溶解再过筛子？多少目？现在的黄豆饼粉已经是很细很细的粉末了。 2011-12-01 08:37:34
zhang8826857(金币+1): 鼓励热心虫子 2011-12-01 09:23:33
你可以将黄豆粉先用水溶解，然后用筛子过滤，把筛子上剩余的大块在用水溶解过滤，直到没有大的颗粒！
我们原来做发酵也存在这种问题，用上述方法就解决了！
楼主可以试试！
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10楼2011-11-30 13:39:00
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