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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 放线菌的培养（天青链霉菌）
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kissyls

金虫 (正式写手)

[求助] 放线菌的培养（天青链霉菌）

最近一直在做放线菌，有一段时间了，偶尔发现有的摇瓶出现染菌现象，还就是我们是实验室，想做批好点的种子上个发酵罐实验下，想向虫友有这方面经验的请教些问题:
1、我想在摇瓶培养（目前用的是改良高氏1号培养基和PDA）时候在培养基里加入点抑制剂（如10%酚/3%重铬酸钾溶液）不知道对种子影响大不，会产生变异吗？
2、如果投入生产中，上发酵罐，考虑到生长周期长，极易出现污染，我是否可以发酵罐同样加入抑制剂？做出来的菌种会变异不?
3、请教下最佳培养条件，如温度、通气量、PH、转速等。
希望有这方面经验前辈、学长多指教，不胜感激。
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我像只鱼儿在你的荷塘,只为和你守候那皎白月光.游过了四季荷花依然香,等你宛在水中央.
1楼2011-06-30 11:19:46
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

kissyls(金币+10): 谢谢你的帮助，还希望多多指教 2011-06-30 17:11:38
rainwander(EPI+1): 2011-06-30 19:31:39
我的建议是不要添加抑制剂，
1.增加发酵成本；
2.提取产品时添加的抑制剂能否处理干净，抑制剂对产品的质量是否会有影响。
3.添加这么高浓度的抑制剂我感觉对放线菌可能会起到抑制作用。
我是做生产的，提供几点建议供参考：
1.菌种纯化。
2.培养基灭菌控制好，使培养基保证无菌。如果培养基中不溶物较多可以适当提高灭菌温度或延长灭菌时间。
3.无菌操作严格，保证在接种的过程中不带入其它的微生物。
4.环境灭菌（包括无菌室、摇床间、摇床等要经常用消毒液杀菌后再用紫外线灭菌）。
5.不知你的放线菌是否产孢子，如果产孢子可以用孢子悬液直接接种种子罐，可以不用摇瓶培养种子。如果必须用摇瓶培养种子我建议加厚纱布塞或在纱布塞中间加棉花或直接用棉塞，在棉塞的外部加几层纱布。
以前我培养放线菌摇瓶种子的时候，也是总出现个别瓶染菌的情况，查了很多，最后将纱布塞改成棉塞好了，再也没有染过菌。
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2楼2011-06-30 15:16:01
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

kissyls(金币+5): 谢谢你，还希望可以和你多讨论下，多指教 2011-06-30 17:25:36
我做放线菌在10L罐上发酵时温度为29度，起始通风比为1：0.3，最大时达到1：1.5，转速控制在400～600rpm，根据溶解氧来控制通风及转速，pH6.0左右。
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3楼2011-06-30 15:22:47
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kissyls

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wgy2007 at 2011-06-30 15:16:01:
我的建议是不要添加抑制剂，
1.增加发酵成本；
2.提取产品时添加的抑制剂能否处理干净，抑制剂对产品的质量是否会有影响。
3.添加这么高浓度的抑制剂我感觉对放线菌可能会起到抑制作用。
我是做生产的，提供几 ...

灰常感谢你的建议，对于添加抑制剂我也考虑过，现在是实验阶段也许会没事，可以顺利生产出来，如果转大的发酵罐成本太高，也许不切实际，还有不确定因数，到底对放线菌影响多大。
还就是你的建议不错，我目前最有可能的就是摇瓶培养环境问题或者是摇瓶纱布太薄了。环境问题不大，没太多影响我多注意下；我也怀疑过纱布太薄，毕竟生长周期太长了，极易污染。
感谢你的建议
1、我在把培养间灭下菌，尽量做到周边无菌
2、尝试下棉塞或者增加纱布的厚度。
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4楼2011-06-30 17:11:00
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kissyls

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wgy2007 at 2011-06-30 15:22:47:
我做放线菌在10L罐上发酵时温度为29度，起始通风比为1：0.3，最大时达到1：1.5，转速控制在400～600rpm，根据溶解氧来控制通风及转速，pH6.0左右。

我不清楚你做的是什么菌，不过想知道你生产什么菌。对于你的参数还是有些疑问的：
1、不是说放线菌有点厌氧吗，通气量可以这么大？
2、转速，在我想好高了，放线菌容易结团，形成菌球，可以考虑尝试下。
3、你做的菌可能偏碱，我做的是天青链霉菌还有白色链霉菌都是偏碱的，我的灭菌前起始PH一般都是7.5左右。
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5楼2011-06-30 17:24:30
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kissyls

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wgy2007 at 2011-06-30 15:16:01:
我的建议是不要添加抑制剂，
1.增加发酵成本；
2.提取产品时添加的抑制剂能否处理干净，抑制剂对产品的质量是否会有影响。
3.添加这么高浓度的抑制剂我感觉对放线菌可能会起到抑制作用。
我是做生产的，提供几 ...

在请教2个问题:
1、你做的也是放线菌吧，你用的是什么培养基？
2、我现在做的菌产孢子的，你说的孢子悬液，是跟一般细菌一样做法吗？在茄子瓶斜面接好种，长出孢子备用。
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6楼2011-07-01 10:50:35
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

kissyls(金币+5): 你好，我可以加你QQ吗？方便像你请教，谢谢啊（我的278975457） 2011-07-05 09:42:11
kissyls(金币+10): 2011-07-11 01:11:09
1. 我做的是放线菌，菌种的不同，代谢产物的不同，控制条件可能是不一样的，应该根据实验来确定，我做的发酵培养基灭菌前pH也是调到7.5，灭菌后的pH在6.7～7.1左右，我说的pH6.0是发酵过程控制；我做的放射线菌耗氧量比较大，发酵液比较粘稠，所以通风比、搅拌转速相对大一些。
2. 种子培养基一般用蛋白胨、盐、葡萄糖，发酵培养基用大豆分离蛋白、酵母浸粉、葡萄糖及一些无机盐、微量元素等。不同的发酵产品使用的原料是不同的，可以查一些相关的文献。
3. 培养孢子是用茄子瓶培养的，一般培养7～10天，长出孢子后放4度左右的冰箱保存备用。
4. 关于培养放射线菌结球的问题我在培养摇瓶种子的时候也出现过，可以在配制培养基是在瓶内加10粒左右的玻璃珠即可解决。在实验罐内培养，搅拌转速高一些是不会结球的。
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7楼2011-07-01 11:37:54
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caokuai1

铁虫 (正式写手)
我做的是白色链霉菌，现在在斜面上我的都张不出菌，我想问一下楼主，你的白色链霉菌长的怎么样啊？？
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8楼2012-11-20 18:58:52
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youxiss

新虫 (初入文坛)
我做的金色链霉菌，母瓶分别置于大小摇床上培养转速230（大摇床进口，小摇床国产，大摇床偏心距较大），培养两天后离心测母瓶菌浓，发现上清液差异很大，什么原因呢？中间的是大摇床上培养的母瓶。
放线菌的培养（天青链霉菌）



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9楼2016-01-21 17:43:09
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