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binlos

新虫 (初入文坛)

[求助] 非常棘手的问题——放线菌固体发酵老是被霉菌污染而没长放线菌

很是惭愧，放线菌固体发酵试验做了好几个月了，一直没有取得进展，老是霉菌污染而放线菌没长出来，尝试过很多途径，试过好几种固体基质，如：菜园土、细沙、麸皮、玉米粉、谷壳等，也尝试过两种基质的混合；试过不同初始含水量，试过延长灭菌时间（60min）、多次灭菌（2次），干热灭菌也试过；还有固体接种前液体培养基划线均未被污染。。。

请诸位帮忙下哈，非常感谢！（Email：binloslyb@163.com）
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1楼 2011-07-12 20:29:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

binlos

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by binlos at 2011-07-12 20:29:36:
很是惭愧，放线菌固体发酵试验做了好几个月了，一直没有取得进展，老是霉菌污染而放线菌没长出来，尝试过很多途径，试过好几种固体基质，如：菜园土、细沙、麸皮、玉米粉、谷壳等，也尝试过两种基质的混合；试过不 ...

灭菌是122摄氏度，60min，2次 都试过。。。。

用细沙是想和菜园土混合在一起，增加菜园土的疏松度，

麸皮培养基经常被黑曲霉或白色霉状物污染
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4楼2011-07-13 20:37:55
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普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-07-12 23:22:54
我怀疑是灭菌的问题，菜园土那么复杂就不说了，但是为什么细沙也灭不好？是不是温度不够高？是不是121-126度湿热灭菌？为什么用细沙呢？没营养的，不知道是不是有什么特别用途。麦麸也好灭菌的，怪了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-12 21:43:17
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-07-13 16:08:10
还是查一下你的培养环境吧，如果总是在染霉菌，培养环境中肯定会有大量的霉菌孢子，应该把环境彻底消毒后再做吧，如果环境处理不好，染菌的机率是非常大的。
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3楼2011-07-13 11:29:21
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binlos

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-12 21:43:17:
我怀疑是灭菌的问题，菜园土那么复杂就不说了，但是为什么细沙也灭不好？是不是温度不够高？是不是121-126度湿热灭菌？为什么用细沙呢？没营养的，不知道是不是有什么特别用途。麦麸也好灭菌的，怪了。

灭菌是122摄氏度，60min，2次 都试过。。。。

用细沙是想和菜园土混合在一起，增加菜园土的疏松度，

麸皮培养基经常被黑曲霉或白色霉状物污染
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5楼2011-07-13 20:40:59
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binlos

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wgy2007 at 2011-07-13 11:29:21:
还是查一下你的培养环境吧，如果总是在染霉菌，培养环境中肯定会有大量的霉菌孢子，应该把环境彻底消毒后再做吧，如果环境处理不好，染菌的机率是非常大的。

试过把培养箱温度调到60摄氏度，消毒一天再固体培养，仍有霉菌污染。。。。
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6楼2011-07-13 20:42:14
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-30 11:12:46
60摄氏度灭菌效果不好的，可以用消毒液进行杀菌，如过氧乙酸、甲醛等，不只是培养箱，室内环境也要灭菌的。
固体培养基灭菌很难灭彻底的，蒸汽的穿透效果不好，灭菌的时候可以将培养基铺的薄一些，灭菌效果可能会好一些。
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7楼2011-07-15 14:09:32
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-01 09:22:49
弱弱得建议 ：  用甲醛把培养箱 熏蒸消毒一下  可能是培养箱的污染
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8楼2011-07-15 14:57:40
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binlos

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wgy2007 at 2011-07-15 14:09:32:
60摄氏度灭菌效果不好的，可以用消毒液进行杀菌，如过氧乙酸、甲醛等，不只是培养箱，室内环境也要灭菌的。
固体培养基灭菌很难灭彻底的，蒸汽的穿透效果不好，灭菌的时候可以将培养基铺的薄一些，灭菌效果可能会 ...

我都是122摄氏度湿热灭菌，室内消毒没试过，这个很难保证，因为在实验室微生物挺多的，很难控制
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9楼2011-07-15 18:59:21
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binlos

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by xinongfish at 2011-07-15 14:57:40:
弱弱得建议 ：  用甲醛把培养箱 熏蒸消毒一下  可能是培养箱的污染

好的，谢谢。。。。
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10楼2011-07-15 19:04:26
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