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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 培养基的差别真的有那么大吗？
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lgs1

木虫 (小有名气)

[求助] 培养基的差别真的有那么大吗？

关于培养基的问题我已经问了很多了，但是每次都会出现新的问题，我的培养基配方是糊精 3%，葡萄糖 1%，花生粉 3%，酵母浸粉 0.25%，K2HPO4 0.05%，MgSO4 0.05%，Fe2SO4 0.0005%，花生粉是在超市里面买的那种用来吃的（最开始我在本地买不到专门用来发酵用的花生粉），做出来的发酵液药效还可以，但是优化来优化去不见提高，而且菌的生长状态感觉也不是太好，我就觉得是花生粉的问题，毕竟不是专门用来发酵的，最近又要上罐子，所以我就从外地买了一些发酵用的花生粉来做，这次菌的生长状态很好，菌丝很粗壮，我以为结果比原来好得多，结果正交做出来用抑菌圈检测没有一个显示出抑菌效果的，另一批只有一点点，这下我懵了，不知道怎么分析这个问题，要说区别的话就是以前的花生粉配出来以后培养基里面会有油漂在水面上，我都不用加消泡剂，发酵期间ph前几天下降的很快，中期以后比较稳定，但都是偏酸，大概6.5左右，现在的ph是前几天也在下降，但是中期以后就开始上升了，最高的时候能达到8.5左右，不过这和文献又是吻合的，需要注意的一点是我的目的产物在碱性条件下很容易被破坏（难道是这个原因？），我每12h都会用氨水或者HCl调节ph至7.0，大体情况就是这个样子，希望大家能帮我分析一下原因以及下一步该怎么做，我已经彻底晕了，谢谢
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1楼2012-08-06 13:39:38
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tachie

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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lgs1: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-08 21:16:14
看样子发酵用的花生饼粉很容易利用了，改变发酵代谢过程，体系改变了，目的产物有偏差，建议配方加点0.05-0.1%左右的精制豆油或粗制豆油或菜籽油之类的，可提供长链的不饱和烷烃，减少初期代谢速度
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2楼2012-08-08 14:33:35
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lgs1: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-08 21:16:42
pH调节的太慢了，应该动态维持恒定的偏酸性环境。如果偏碱性，即使产生发酵产物也有可能被分解掉了。根据你的描述，偏碱性好像有利于菌的生长，你可以在菌体生长后期调节偏酸环境。
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3楼2012-08-08 20:56:38
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lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tachie at 2012-08-08 14:33:35
看样子发酵用的花生饼粉很容易利用了，改变发酵代谢过程，体系改变了，目的产物有偏差，建议配方加点0.05-0.1%左右的精制豆油或粗制豆油或菜籽油之类的，可提供长链的不饱和烷烃，减少初期代谢速度

用原来的花生粉得到的发酵产物是混合物，都是有药效的，而我的目的产物需要添加前体，以前添加前体后目的产物量很低，一个原因是我添加的量比较少（有毒性），还有一个原因我觉得会不会是花生粉中的烷烃相对浓度比我的前体高，二者之间是竞争关系？如果我现在发酵用的花生粉含油量低的话我的前体就能更好的被利用了呢？
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4楼2012-08-08 21:36:22
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lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-08 20:56:38
pH调节的太慢了，应该动态维持恒定的偏酸性环境。如果偏碱性，即使产生发酵产物也有可能被分解掉了。根据你的描述，偏碱性好像有利于菌的生长，你可以在菌体生长后期调节偏酸环境。

那样不就是一天至少需要调3次pH了？这样感觉很容易污染啊
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5楼2012-08-08 21:37:13
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by lgs1 at 2012-08-08 21:37:13
那样不就是一天至少需要调3次pH了？这样感觉很容易污染啊...

你的发酵罐不是自动通过流加调节的吗？没有pH动态监测？我用过的发酵罐是通过pH动态监测自动调节的。
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6楼2012-08-09 00:42:41
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★
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lgs1: 金币+1, ★有帮助 2012-08-09 15:49:45
我之前用过豆粕，我和你情况差不多，小试是没有现成的发酵用豆粕，就直接用的市场上大豆打成粉后做发酵。查了很多资料，发酵用豆粕应该是榨取完油脂后剩余的东西，里面蛋白很多，单比大豆少了油类物质。我觉得是不是这方面有差别导致的。
还有发酵用玉米浆，这个东西也是提取完什么东西之后的废料。
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7楼2012-08-09 08:49:06
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★
lgs1: 金币+1, ★有帮助 2012-08-09 15:49:49
还有个建议就是可以在培养基中加点磷酸盐缓冲液，可以试一下
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8楼2012-08-09 08:51:07
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lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-09 00:42:41
你的发酵罐不是自动通过流加调节的吗？没有pH动态监测？我用过的发酵罐是通过pH动态监测自动调节的。...

我还在做摇瓶
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9楼2012-08-09 15:49:13
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lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wt3532 at 2012-08-09 08:51:07
还有个建议就是可以在培养基中加点磷酸盐缓冲液，可以试一下

一般是多大浓度的呢，我看书上的范围都太大了
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10楼2012-08-09 15:50:29
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