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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 培养基灭菌前后的差异问题如何解决
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zxmzyu1025

铜虫 (小有名气)

[求助] 培养基灭菌前后的差异问题如何解决 已有1人参与

各位虫友，我采用人工配置培养基，灭菌处理后接种细菌做摇瓶试验，目前遇到的困难是：1培养基中存在葡萄糖，蔗糖，蛋白胨，氯化铵等，灭菌采用115度30min，还是会有表观颜色上的差别 2灭菌前后pH有较大差异，灭菌前7-8，灭菌后基本上10.5左右，这样肯定不利于微生物生长，请问如何解决这一问题
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1楼 2011-09-01 21:31:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sero

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zxmzyu1025(金币+5): 2011-09-02 17:11:52
这样肯定是不行的！！！！葡萄糖是不能和蛋白质在一起灭菌的！！！！！！！！！！！会产生美拉德颜色反应的啊~~！！自己去百度一下褐变反应！！把葡萄糖单独灭。115.20min。其余一起灭，再在操作台混合。
         希望能帮到你！
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5楼2011-09-01 22:46:32
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我来回答第二个问题
你把氯化铵用细菌过滤器灭菌
这样pH就不会升高了
原因是  高温高压下 氯化铵发生了水合反应
生成了氨碱类物质

第一个灭菌 为了防止发生颜色反应
可以把葡萄糖配成母液 单独灭菌
灭菌后 加到培养基中就行了
以后都可以用这个法子~~~
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9楼2011-09-04 01:06:14
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henshui005

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果葡萄糖站培养基组分中所占的比列很小 可以同蛋白质一起灭菌，如果葡萄糖含量很高 应该单独灭 然后添加。
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14楼2013-07-11 08:50:29
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普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

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【答案】应助回帖

灭抽滤器，滤膜，试剂瓶，超净台里面抽。
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2楼2011-09-01 21:51:58
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zxmzyu1025

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-09-01 21:51:58:
灭抽滤器，滤膜，试剂瓶，超净台里面抽。

不能用高压蒸汽灭菌这种方法了是么，这样灭菌处理后测出来的COD、氮磷指标应该都比处理前的小吧
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3楼2011-09-01 22:10:29
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

zxmzyu1025(金币+5): 2011-09-02 17:11:43
如果要精确分析成分变化的话，需要考虑的一点就是尽量少的改变培养基成分，过滤除菌就是最好的方法。葡萄糖高温会有部分碳化，蛋白胨中含的成分灭菌也难保证不会造成一些蛋白的变性水解，从而改变培养基营养及pH。
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4楼2011-09-01 22:16:44
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zxmzyu1025

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sero at 2011-09-01 22:46:32:
这样肯定是不行的！！！！葡萄糖是不能和蛋白质在一起灭菌的！！！！！！！！！！！会产生美拉德颜色反应的啊~~！！自己去百度一下褐变反应！！把葡萄糖单独灭。115.20min。其余一起灭，再在操作台混合。
       ...

再请问蔗糖应和葡萄糖一起灭菌吧，蔗糖水解也会产生葡萄糖的
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6楼2011-09-02 17:25:31
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sero

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你做复合氮源啊？那肯定了~！
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7楼2011-09-04 00:34:17
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sero

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

复合碳源，打错了~~你准备做复合碳源吗？那也是要和其他的分开的啊
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8楼2011-09-04 00:35:32
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zier1011

木虫 (著名写手)
引用回帖:
1019334楼: Originally posted by molecula at 2011-09-04 01:06:14:
我来回答第二个问题
你把氯化铵用细菌过滤器灭菌
这样pH就不会升高了
原因是  高温高压下 氯化铵发生了水合反应
生成了氨碱类物质

第一个灭菌 为了防止发生颜色反应
可以把葡萄糖配成母液 单独灭菌
灭菌 ...

你好，氯化铵在高温条件下不是应该生成NH3和HCl，弱碱和强酸，应该pH下降呀，为什么会出现pH升高的现象
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花还香香的
10楼2012-05-03 10:02:21
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