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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵罐小试问题
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345281709-

金虫 (正式写手)
发酵参数的优化是个何很繁琐的工作，慢慢来。
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质本洁来还洁去
11楼2012-10-17 16:03:37
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zys1256

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠长到5都成问题，我们大肠随便长长都是一百多的OD
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12楼2012-10-18 18:15:40
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crayoon

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得接种量不需要加大，这个应该不是主要的原因。你要注意比较发酵过程中大罐和小罐的过程参数的差异，比如OD、pH、DO等能检测的参数的变化趋势，试试从这些参数的差异中能不能找到原因。
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13楼2012-10-19 08:30:22
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hanjun80 at 2012-10-17 15:29:29
1、你的培养基配方？
2、你的培养工艺？包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
有了上述两个东东，才能给你确切的建议，只有问题，没法回答……

培养基配方：玉米浆3.3%，KH2PO4 0.17%，MgSO4 0.033%，富马酸 0.83%，NaCl 0.2%，接种量 0.033%，有加消泡剂，罐体是玻璃的,pH7.0，温度40-42℃，没有补料，这些都是大罐上的，我照做的，只是把风量和转数提高了
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14楼2012-10-19 10:31:04
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wzq_ing at 2012-10-17 08:37:16
既然知道溶氧，把小罐的溶氧调到和大罐一样，转速风量都增加，但不能只增加一个，因为还要考虑菌承受的剪切力情况，剪切力过大也不利于生长，还有罐压要考虑，跟大罐保持一致，
楼主考虑下六楼说的情况，增加氮源 ...

大罐上没有溶氧电极......转数风量两个都增加了的，我刚做了加大氮源的，结果比以前要稍微好些
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15楼2012-10-19 10:33:37
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potential8707

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wt3532 at 2012-10-17 10:42:45
溶氧达不到，pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转（大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题，小罐不存在这个问题），不过不知道你的培养基是什么，防止起泡，要不时加消泡剂，通气量每分钟和发酵 ...

培养基配方见下面的回答，灭菌前就在培养基里加消泡剂了。发酵液体积为3L，通气量设定的为5L/min，会不会大了？昨天将转数提到300rpm，结果比以前稍微好些，可OD还是不达标，罐体是玻璃的。我想着是不是培养基配方就有问题啊
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16楼2012-10-19 10:38:01
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dengchun14

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

OD值达不到说明培养条件对菌体有影响，放大的时候转速风量都要按经验公式来放大，比如保持VVm相等，按照搅拌桨线速度放大等等，如果转速过大对菌体伤害较大，应为大肠杆菌还是比较脆弱！另外，看看你的培养基什么的是不是有变化，或者菌种的问题，做下摇瓶实验呢？要从全面考虑小试失败的原因，还有其他很多原因，是否染菌，灭菌温度是否过高破坏培养基，放大是否合理，还有就是设备的检修等等！
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世界上最遥远的距离，就是你在拍写真照片，而我在拍电镜照片。
17楼2012-10-19 10:58:38
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dengchun14

金虫 (正式写手)
另外消泡剂是不是加的多了？也有影响的哈
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世界上最遥远的距离，就是你在拍写真照片，而我在拍电镜照片。
18楼2012-10-19 10:59:15
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-23 17:05:06
potential8707: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 14:47:17
zhangxingc: 回帖置顶 2013-02-19 12:39:13
我不会跟你扯什么公式，根据经验，大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以，初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300，通气适当小点设个2L就可以了，后期根据生长需要慢慢隔1-2小时稍微加大点通气量，同事慢慢100  100的调转速，直到最终转速到1000  ，这个过程只是一个大概的过程。因为你们那边好像没有溶氧电极。
另外大肠杆菌没有那么脆弱，小罐上的拿点剪切力还是可以承受的，楼上的如果没做过大肠杆菌发酵请不要根据自己的想法误导别人
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potential8707 potential8707
19楼2012-10-19 13:09:05
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

看了你的培养基配方了，接种量太少了，发酵罐一般5%-10%接种，0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵，会不会是因为大罐的散热系统做的不好，一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆，你怎么确定你的菌浓。
还有一点就是你培养基氮源基本没有，参考别的文献，建议你氮源可以 添加 无机氮源硫酸铵 或者 条件好 添加蛋白胨 或者 氨水 或者 硝酸钾 或者大豆粉。
之前你说你添加氮源，OD好一点了，可能是你的氮源添加的太少了 ，蛋白胨等有机氮源添加 1%的量试一下。
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20楼2012-10-19 13:20:53
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