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金虫 (小有名气)

[求助] 关于带卡那抗性的重组大肠杆菌

带卡那抗性的重组大肠杆菌，做4.5吨发酵罐中试，在发酵前期取样涂含卡那的LB平板，长的菌落数和无卡那的LB平板相近，菌体基本都带卡那抗性。但是发酵12小时（IPTG诱导后1小时），取样涂卡那平板，一个菌落也不长，无卡那的LB平板还是正常的。而此时，产物还是有表达的。不知是什么原因？

1楼 2013-03-24 19:25:58

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铜虫 (正式写手)

目测是抗性基因在传代过程中丢失了吧。。。。。

2楼2013-03-25 09:51:57

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木虫 (正式写手)

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Xsonglin(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 14:23:07

不知道你发酵罐里加没加抗生素呢？质粒在没有选择压力情况下是容易丢失的，特别是发酵罐条件下，菌体复制速度快，更易发生质粒丢失。至于产物表达的问题，不知道你有没有设立负对照及表达量如何，因为很多质粒的启动子是不严谨的，即不诱导也有本地表达，在菌体密度很大的情况下，有可能观察到目的蛋白的表达。

3楼2013-03-25 12:06:42

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木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Xsonglin(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 14:23:19

4.5立的罐子，估计加抗生素的话，成本提高了不少。
即使加了抗生素后期高密度发酵情况下，质粒丢失是很严重的，即使所有菌都丢了质粒，但是表达的酶还在起催化作用，所以有产物产生是很正常的。

Thank-you，so-blue.

4楼2013-03-25 15:37:49

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