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Xsonglin

金虫 (小有名气)

[求助] 关于带卡那抗性的重组大肠杆菌

带卡那抗性的重组大肠杆菌,做4.5吨发酵罐中试,在发酵前期取样涂含卡那的LB平板,长的菌落数和无卡那的LB平板相近,菌体基本都带卡那抗性。但是发酵12小时(IPTG诱导后1小时),取样涂卡那平板,一个菌落也不长,无卡那的LB平板还是正常的。而此时,产物还是有表达的。不知是什么原因?
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mao877516786

铜虫 (正式写手)

目测是抗性基因在传代过程中丢失了吧。。。。。
2楼2013-03-25 09:51:57
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Xsonglin(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-27 14:23:07
不知道你发酵罐里加没加抗生素呢?质粒在没有选择压力情况下是容易丢失的,特别是发酵罐条件下,菌体复制速度快,更易发生质粒丢失。至于产物表达的问题,不知道你有没有设立负对照及表达量如何,因为很多质粒的启动子是不严谨的,即不诱导也有本地表达,在菌体密度很大的情况下,有可能观察到目的蛋白的表达。
3楼2013-03-25 12:06:42
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Xsonglin(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-27 14:23:19
4.5立的罐子,估计加抗生素的话,成本提高了不少。
即使加了抗生素后期高密度发酵情况下,质粒丢失是很严重的,即使所有菌都丢了质粒,但是表达的酶还在起催化作用,所以有产物产生是很正常的。
Thank-you,so-blue.
4楼2013-03-25 15:37:49
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