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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌转化时出现异常现象
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费云舟

金虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌转化时出现异常现象

最近做了好几次大肠杆菌的转化，卡纳抗性板上筛选，平板上有大小两种形态的菌落，大菌落数量少，应该是阳性克隆，小菌落几乎布满全板。
重复了好几次都是这种情况，重新制备过感受态细胞，原始菌也在含卡纳LB中验证了，没有发现增殖。
有人说是转化效率太高，小弟实在是搞不清状况了，特地请教高手。
另外此前做了一次正常，而且酶切片段都没换过，-20°化冻，每次转化前再连接一次。

[ Last edited by 费云舟 on 2011-6-16 at 10:03 ]
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1楼2011-06-16 09:55:12
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晓来风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

费云舟(金币+1): 实验仪器染菌的可能很低，操作的超净台紫外灭菌应该彻底，用过别人的平板也是同样的结果，连接酶也不会有污染 2011-06-16 12:19:32
污染了吧？？就算样品没有污染，也有可能是你的实验仪器，其他的器具污染了。
又或者是平板中抗生素加少了？！
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穷则独善其身，达则兼善天下。
2楼2011-06-16 11:20:48
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nevin199

木虫 (小有名气)

轩辕

【答案】应助回帖

我觉得是转化效率太高了。。。。。。
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纠结
3楼2011-06-16 14:26:48
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费云舟

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by nevin199 at 2011-06-16 14:26:48:
我觉得是转化效率太高了。。。。。。

Originally posted by nevin199 at 2011-06-16 14:26:48:
我觉得是转化效率太高了。。。。。。
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4楼2011-06-17 15:40:20
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wozha

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

费云舟(金币+1): 要怎么解决呢 2011-06-18 10:26:53
同意ls，小菌落会不会是卫星菌落呢？如果环绕着阳性菌落就没错了
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5楼2011-06-17 16:57:06
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费云舟

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wozha at 2011-06-17 16:57:06:
同意ls，小菌落会不会是卫星菌落呢？如果环绕着阳性菌落就没错了

要怎么解决呢
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6楼2011-06-18 10:28:10
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wozha

铜虫 (小有名气)
最近我也遇到这样的情况 感觉是受体菌耐受性提高了 即阴性菌也有了一些抗性，考虑提高抗生素浓度，以及换一批受体菌试试（公司的东西也不一定靠谱啊，每批总有差异）
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7楼2011-07-17 08:42:36
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费云舟

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wozha at 2011-07-17 08:42:36:
最近我也遇到这样的情况 感觉是受体菌耐受性提高了 即阴性菌也有了一些抗性，考虑提高抗生素浓度，以及换一批受体菌试试（公司的东西也不一定靠谱啊，每批总有差异）

卡那浓度提高50%，暂时解决问题
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8楼2011-07-18 09:53:58
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caoshanshan1

银虫 (初入文坛)
我在做完电转化后铺板进行筛选也遇到这种情况一个大菌落周围有很多小的菌落像卫星菌落，不知该怎么解释老师建议我提高kana的浓度
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正能量
9楼2011-08-22 14:01:35
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瓶儿花

金虫 (小有名气)
是卫星菌落。原因是时间培养过长，使得抗性菌落分泌一种物质将抗性分解，长出卫星菌落。一般转化后培养12-14h后从培养箱取出防4℃冰箱显色。
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10楼2011-08-30 10:14:59
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