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费云舟

金虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌转化时出现异常现象

最近做了好几次大肠杆菌的转化,卡纳抗性板上筛选,平板上有大小两种形态的菌落,大菌落数量少,应该是阳性克隆,小菌落几乎布满全板。
重复了好几次都是这种情况,重新制备过感受态细胞,原始菌也在含卡纳LB中验证了,没有发现增殖。
有人说是转化效率太高,小弟实在是搞不清状况了,特地请教高手。
另外此前做了一次正常,而且酶切片段都没换过,-20°化冻,每次转化前再连接一次。

[ Last edited by 费云舟 on 2011-6-16 at 10:03 ]
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

是卫星菌落。原因是时间培养过长,使得抗性菌落分泌一种物质将抗性分解,长出卫星菌落。一般转化后培养12-14h后从培养箱取出防4℃冰箱显色。
10楼2011-08-30 10:14:59
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晓来风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

费云舟(金币+1): 实验仪器染菌的可能很低,操作的超净台紫外灭菌应该彻底,用过别人的平板也是同样的结果,连接酶也不会有污染 2011-06-16 12:19:32
污染了吧??就算样品没有污染,也有可能是你的实验仪器,其他的器具污染了。
又或者是平板中抗生素加少了?!
穷则独善其身,达则兼善天下。
2楼2011-06-16 11:20:48
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nevin199

木虫 (小有名气)

轩辕

【答案】应助回帖

我觉得是转化效率太高了。。。。。。
纠结
3楼2011-06-16 14:26:48
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费云舟

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by nevin199 at 2011-06-16 14:26:48:
我觉得是转化效率太高了。。。。。。

Originally posted by nevin199 at 2011-06-16 14:26:48:
我觉得是转化效率太高了。。。。。。
4楼2011-06-17 15:40:20
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