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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌转化时出现异常现象
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费云舟

金虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌转化时出现异常现象

最近做了好几次大肠杆菌的转化，卡纳抗性板上筛选，平板上有大小两种形态的菌落，大菌落数量少，应该是阳性克隆，小菌落几乎布满全板。
重复了好几次都是这种情况，重新制备过感受态细胞，原始菌也在含卡纳LB中验证了，没有发现增殖。
有人说是转化效率太高，小弟实在是搞不清状况了，特地请教高手。
另外此前做了一次正常，而且酶切片段都没换过，-20°化冻，每次转化前再连接一次。

[ Last edited by 费云舟 on 2011-6-16 at 10:03 ]
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1楼 2011-06-16 09:55:12
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瓶儿花

金虫 (小有名气)
是卫星菌落。原因是时间培养过长，使得抗性菌落分泌一种物质将抗性分解，长出卫星菌落。一般转化后培养12-14h后从培养箱取出防4℃冰箱显色。
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10楼2011-08-30 10:14:59
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晓来风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

费云舟(金币+1): 实验仪器染菌的可能很低，操作的超净台紫外灭菌应该彻底，用过别人的平板也是同样的结果，连接酶也不会有污染 2011-06-16 12:19:32
污染了吧？？就算样品没有污染，也有可能是你的实验仪器，其他的器具污染了。
又或者是平板中抗生素加少了？！
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穷则独善其身，达则兼善天下。
2楼2011-06-16 11:20:48
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nevin199

木虫 (小有名气)

轩辕

【答案】应助回帖

我觉得是转化效率太高了。。。。。。
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纠结
3楼2011-06-16 14:26:48
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费云舟

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by nevin199 at 2011-06-16 14:26:48:
我觉得是转化效率太高了。。。。。。

Originally posted by nevin199 at 2011-06-16 14:26:48:
我觉得是转化效率太高了。。。。。。
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4楼2011-06-17 15:40:20
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