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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化后培养基上的单菌落怎么那么少，还有卫星菌落
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爱琪琪吉子77

铜虫 (初入文坛)

[交流] 转化后培养基上的单菌落怎么那么少，还有卫星菌落 已有6人参与

转化后，在有氨苄青霉素的LB培养基上培养，一个板上只有几个菌落，还有一部分是卫星菌落，有的说是放在培养箱里久了就长成了卫星菌落，可有的说放再久也不会长成卫星菌落，如果是卫星菌落说是可能是污染的。一个板上不怎么也应该有300个单菌落吗？我的怎么只有几个。PCR后发现是我要的1600pb，但我怕是污染的。是不是链接的问题，时间短，效率低，只连接上了一小部分才出现这种情况啊。
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1楼 2015-06-09 22:07:23
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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既然已经成功得到阳性转化菌，为什么还要再做？

氨苄青霉素的抗性基因编码一个酶，被阳性转化菌分泌到胞外将菌所在地方的氨苄青霉素的酰胺环切开，培养的时间越久，酶扩散的范围越大，平板上的氨苄青霉素被破坏得就越多。氨苄青霉素抑制了阴性转化菌的生长，久了之后自然就会有阴性菌在阳性菌的周围长，形成卫星菌落了。

没必要担心
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2015-06-11 03:31:41
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a13515517892

木虫 (小有名气)
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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你涂板是怎么涂的，转化后直接涂布还是离心涂布的，或者涂布的量多大，连接一般连大概半小时就ok，
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2楼2015-06-09 22:11:25
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爱琪琪吉子77

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-06-09 22:11:25
请问你涂板是怎么涂的，转化后直接涂布还是离心涂布的，或者涂布的量多大，连接一般连大概半小时就ok，

直接涂板的，一个板加入了100微升
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3楼2015-06-09 23:58:49
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a13515517892

木虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱琪琪吉子77 at 2015-06-09 23:58:49
直接涂板的，一个板加入了100微升...

如果直接涂布的斑少，可以离心涂布
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4楼2015-06-10 08:23:59
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