| 查看: 527 | 回复: 2 | |||
cs2951819银虫 (小有名气)
|
[求助]
RT-PCR引物设计小白求问 已有1人参与
|
|
我已知一个基因的mRNA序列，现在我想根据mRNA序列，最终得到DNA序列，并做表达，那么我做RT-PCR，根据mRNA设计引物，5’和3’端的引物分别是什么呢？ 5’端引物和mRNA是互补，3’端引物和mRNA序列一致？比如我随便举个mRNA序列例子，如下：TTCCCGAGCTCACCTTCCAGCCCAGCCCCGCCCCCGACCCGCCTGGCGGCCTCACCTACTTTCCCGTGGCCGACCTGTCTATCATCGCCGCCCTCTATGCCCGCTTCACCGCCCAGATCCGAGGCGCCGTCGACCTGTCCCTCTATCC，求大神告知，两个引物大概应该是什么样的？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于引物设计的问题
已经有11人回复
- 求助设计一种克隆方法
已经有8人回复
- 本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长 。。。
已经有16人回复
- 请分子生物学高手帮忙看看下面的PCR体系...
已经有13人回复
- 新人一个，关于引物设计的问题
已经有3人回复
- qrt-pcr加cDNA的量，怎么加？
已经有12人回复
- 小白求助基因克隆步骤
已经有9人回复
- 新手求助关于逆转录PCR问题
已经有9人回复
- 融合PCR详细步骤
已经有8人回复
- 关于pcr的几个问题，请教大家，先谢谢了！
已经有3人回复
- PCR扩增DNA序列无条带
已经有46人回复
- 求助：相对定量qRT-PCR，需要定量mRNA或者cDNA吗？
已经有4人回复
- 人类基因组DNA引物设计问题
已经有7人回复
- 关于cDNA的疑惑
已经有24人回复
- 请问，用基因组DNA和cDNA做模板进行PCR有什么区别呀？
已经有6人回复
- 测序结果分析，以及RACE引物设计。求助呢
已经有3人回复
- 提取RNA电泳上样量
已经有21人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 想请教下有关测序的问题！急！！！
已经有10人回复
- cDNA做普通PCR扩不出条带来
已经有13人回复
- 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教下巢式PCR与二次PCR的区别
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【讨论】如何批量更改sybyl mol2分子格式的内部外部名称？
已经有13人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cs2951819: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-01 15:39:32
感谢参与，应助指数 +1
cs2951819: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-01 15:39:32
|
首先，你说的mRNA应该是某基因的表达标签，完整的EST应该包含有CDS全长和5’-、3’-UTR区域。这个通常需要用你材料的cDNA为模板扩增。 至于引物，找到你的模板序列，一般用primer premier软件进行设计。设计出来的引物，通俗点说，你应该发现其正向引物与模板中某一段一致，反向引物与模板中某一段反向互补。这两个引物之间即是你要扩增的片段。 做定量表达，其长度最好在80-250 bp之间，并且靠近3’-UTR区，设计两对引物最好。 |
2楼2015-06-01 14:40:19
cs2951819
银虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 121.1
- 散金: 52
- 帖子: 55
- 在线: 64.8小时
- 虫号: 1199908
- 注册: 2011-02-07
- 性别: GG
- 专业: 食品加工技术
3楼2015-06-01 15:39:33
