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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 求助设计一种克隆方法
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397608492

新虫 (小有名气)

[求助] 求助设计一种克隆方法 已有1人参与

如题
        刚刚接手一个新课题，要克隆来源于一种植物的一段基因到宿主里面，但是这个植物没有被测过序，基因序列也不知道，只知道该基因编码蛋白N端的10个氨基酸序列和蛋白质的分子量大小(前人的工作)，新手第一次发帖，金币不多，大恩不言谢。
P.S：我个人认为应该要通过mRNA弄RT-PCR，但是这个引物不好设计啊，该怎么办呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-04-20 00:34:46
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
我想知道既然不知道基因序列，是如何知道的N端的10个序列的，使蛋白测序，质谱，还是比较的同源物种。
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2楼2015-04-20 07:54:06
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397608492

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-04-20 07:54:06
我想知道既然不知道基因序列，是如何知道的N端的10个序列的，使蛋白测序，质谱，还是比较的同源物种。

打的肽指纹谱

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3楼2015-04-20 09:12:14
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那能不能多找上几段，设计引物扩增中间片段，再用RACE获得全长。
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4楼2015-04-20 10:39:48
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397608492

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-04-20 10:39:48
那能不能多找上几段，设计引物扩增中间片段，再用RACE获得全长。

能说具体一点吗

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5楼2015-04-20 12:12:42
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 397608492 at 2015-04-20 12:12:42
能说具体一点吗
...

用已知的肽段设计简并引物，以cDNA为模板，扩增中间片段，测序后设计RACE引物，做RACE，得到全长。
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6楼2015-04-20 16:42:34
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sandycool

铁虫 (正式写手)
你好，请问现在你做到哪一步了？

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7楼2015-10-24 10:02:37
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397608492

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sandycool at 2015-10-24 10:02:37
你好，请问现在你做到哪一步了？

都表达了

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8楼2015-10-25 00:22:15
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sandycool

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 397608492 at 2015-10-25 00:22:15
都表达了
...

那你这个引物当初是如何设计的呢？

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9楼2015-10-25 10:51:34
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