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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助转录组测序完成后，后续荧光定量、基因克隆引物设计问题
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菜菜0929

木虫 (小有名气)

[求助] 求助转录组测序完成后，后续荧光定量、基因克隆引物设计问题 已有1人参与

我们课题组最近做了转录组测序，然后找到差异基因，这些基因都给出拼接出来的序列，我要克隆某些基因。
1、我是需要3‘、5’、再全长这样的顺序来克隆还是直接设计一个全长引物直接克隆出来？
2、我要怎样利用这样一条拼接出来的大概1000Kb的序列进行PCR引物设计和荧光定量PCR引物设计呢？是要直接拿这条已给出的拼接出来的序列在primer5上直接设计呢？还是要先去NCBI上比对出相似序列，再比较着用DNAman什么的设计？
求高人指点
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你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下
1楼 2013-12-29 19:39:02
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
1000Kb...这么长。。。
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2楼2013-12-31 19:31:01
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菜菜0929

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-12-31 19:31:01
1000Kb...这么长。。。

是啊，大概1000多，有什么建议

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你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下
3楼2014-01-01 08:33:39
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yqzqlucky

铜虫 (小有名气)
我也很想知道方法，求高人指点！
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4楼2014-01-01 10:17:32
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菜菜0929

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-12-31 19:31:01
1000Kb...这么长。。。

没人啊，没人啊
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你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下
5楼2014-01-03 19:01:00
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南面涯

金虫 (小有名气)
是1000 bp吧，怎么可能是1000 Kb啊。
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6楼2014-06-27 14:33:48
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菜菜0929

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 南面涯 at 2014-06-27 14:33:48
是1000 bp吧，怎么可能是1000 Kb啊。

额(⊙o⊙)…是的

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你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下
7楼2014-06-28 00:49:35
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kero.D

新虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的问题，楼主可不可以教我一下
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优秀习惯养成中
8楼2015-12-14 23:40:44
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蓝莓好吃吗87

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这么长肯定要分段设计引物了，并且要blast看在别的染色体是否有同源序列了

发自小木虫IOS客户端
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9楼2015-12-14 23:54:46
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