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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序信号弱
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】测序信号弱 已有6人参与

最近我的实验进行到测序阶段。第一次是自己用质粒抽提试剂盒抽提质粒寄出去测序的，测序公司反馈的结果是信号太弱，一个反应测到后面就全是杂峰了；第二次我把菌液寄出去测序，后面的结果页是一个反应都没侧全，后面的部分也都是杂峰。有没有人知道这个的问题出在哪？我要怎么重新改进之前的实验呢？
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1楼 2010-05-31 08:09:01
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curie

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有杂峰是不是说明单克隆不纯，扎个单克隆再测序看看
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2楼2010-05-31 09:47:34
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-05-31 11:34:41
1.不是单克隆
2.序列有复杂结构比如串联的C，G
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3楼2010-05-31 10:23:02
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zsxnd

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-05-31 10:23:02:
1.不是单克隆
2.序列有复杂结构比如串联的C，G

同意2 的原因，一般1的太少了！
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4楼2010-05-31 15:19:38
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢交流~~ 2010-05-31 19:03:58
首先保证自己送出去的样品是单克隆

其次就是序列本身的问题了，测序公司网站上都会有关于杂峰、信号弱或者信号中断的说明。高GC含量，重复的A，都有可能导致问题。甚至一些表面看不出来有什么特殊的序列，也会因为实际产生二级结构的原因影响测序反应。如果测序出现了问题，最好能把自己已知的序列信息提供给测序公司，技术人员会根据他们的经验分析这个序列到底是什么情况，改进测序条件。他们一般都有针对不同类型序列的不同方案。提前通知他们样品的特殊序列有时候能减少不必要的时间浪费。
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5楼2010-05-31 15:45:30
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有的时候也跟你选择的通用引物有关系，试试换个引物
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6楼2010-05-31 16:00:52
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对 引物关系很大
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7楼2010-05-31 17:07:58
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