应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有cds序列和全基因组序列,如何设计引物来克隆和表达!
181/2返回列表12下一页
查看: 5139  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] 有cds序列和全基因组序列,如何设计引物来克隆和表达! 已有4人参与

我想对一个酶基因进行克隆和表达,现在知道这个酶基因的cds序列,以及这个菌的基因组序列,请问如果我想得到这个基因,在设计引物的时候应该怎么做?这方面我是菜鸟,本来就想用这个cds序列两端设计引物的,但是看大家有的说什么要找到保守序列,也有的说只用cds序列就行,只用cds的话以后会不会影响到表达呢?哎呀,我说的没有条理,见谅啊,大家放假了,实在心里很着急,还望高手给予指导!越详细越好!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-15 21:10:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ffzhb123

新虫 (初入文坛)
你好，我也是要对一个酶基因进行克隆，全基因测序已经完成，预测到了这个酶基因，对于设计引物这方面实在是不了解，希望可以交流一下
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2016-03-14 09:51:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

古木宁天

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-07-16 08:35:44
主要看你的菌株，如果你要用的菌上有启动子序列，就不需要考虑保守序列，
赞一下 回复此楼
懒
2楼2014-07-15 21:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-07-15 21:27:01
主要看你的菌株，如果你要用的菌上有启动子序列，就不需要考虑保守序列，

怎么看启动子序列呢?是在cds序列上找还是在cds序列往前一段碱基上找呢?
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-15 21:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-16 08:35:49
well_想太多: 金币+1, ★有帮助 2014-07-16 09:54:58
一般 启动子在起始密码子前找。cds区克隆先提rna逆转录，设计cds区引物来pcr然后粗略的测测序有个底，然后通过T载体连接到质粒上，最后导入目的菌里面表达，然后提出表达物来验证！大概思路是这样子的。欢迎交流，我也做cds区克隆

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
4楼2014-07-16 01:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

你是想做真核还是原核呢？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
5楼2014-07-16 01:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-16 01:51:34
你是想做真核还是原核呢？

谢谢交流,我是打算做原核的.不明白为什么要提rna逆转录?我是想通过设计引物得到这个酶基因序列,然后直接进行克隆和表达,不知道我说的对不对
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-16 09:54:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by well_想太多 at 2014-07-16 09:54:27
谢谢交流,我是打算做原核的.不明白为什么要提rna逆转录?我是想通过设计引物得到这个酶基因序列,然后直接进行克隆和表达,不知道我说的对不对...

不是做真核的就不用提RNA来做定量分析了。原核的直接克隆了是！我们做真核比较麻烦
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
7楼2014-07-16 10:53:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-16 10:53:19
不是做真核的就不用提RNA来做定量分析了。原核的直接克隆了是！我们做真核比较麻烦...

恩,那请问设计引物直接就在cds两端设计就行吗?还需要上下各找100bp吗,我发现我的cds序列中有三个orf,如果我就在cds的两端设计引物的话,那对后面克隆表达有影响吗
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-16 14:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生
★
well_想太多(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-16 19:50:20
引用回帖:
8楼: Originally posted by well_想太多 at 2014-07-16 14:05:20
恩,那请问设计引物直接就在cds两端设计就行吗?还需要上下各找100bp吗,我发现我的cds序列中有三个orf,如果我就在cds的两端设计引物的话,那对后面克隆表达有影响吗...

要是拿去测序的话至少前后留50bp的测不准区域吧，只有先慢慢做出来测序了再看吧 祝你顺利！
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
9楼2014-07-16 18:23:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-16 18:23:26
要是拿去测序的话至少前后留50bp的测不准区域吧，只有先慢慢做出来测序了再看吧 祝你顺利！...

楼主，help,克隆的引物，从ATG开始发夹结构，往前走一段，大致走多少个合适引物20bp往前走了12bp是不是走的有点多，
赞一下 回复此楼
踏实
10楼2014-07-17 11:26:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 well_想太多 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-16 01:21 by Xttdmn
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 东南大学364求调剂 +3 JasonYuiui 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:57 by 无际的草原
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 301求调剂 +3 归零lbm 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:20 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭