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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 如何找出植物基因侧翼的未知序列
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朱庆平

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何找出植物基因侧翼的未知序列 已有2人参与

求助各位战友：现已知一个植物基因的部分序列（387bp左右），如何来获取已知序列侧翼的未知序列？我想用genome-walking的方法来做，打算买Takara Genome-Walking Kit，但是担心该试剂盒里的四个简并引物如果都没有结果该怎么办？这样是花了钱又做不了实验啊！顺便问问，那个Takara Genome-Walking Kit多少钱啊？
另：我的一位师兄，也用Genome-Walking的方法找出了两个植物基因，但他都没用试剂盒，他自己在网上找到几个别人设计好的简并引物，再加上他自己设计的基因特异引物，拿给生物公司合成后就做实验了，结果他居然把这俩基因的全长序列整出来了，我就觉得很匪夷所思啊！
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1楼 2014-05-09 17:07:18
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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你做walking目的是什么？如果是拿基因全长，那应该做race

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2楼2014-05-09 18:36:53
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youlinglyw

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一匡天下

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-09 20:08:48
楼上说的好，从已知扩未知要用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。

不过，问题还在，那就是内含子问题无法解决
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天行健
3楼2014-05-09 19:18:15
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-09 20:08:56
接楼上，这个时候，你可以做的是，根据race扩出来的序列
设计引物，把内含子扩出来。
我知道的就这么多
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天行健
4楼2014-05-09 19:20:54
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朱庆平

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-09 18:36:53
你做walking目的是什么？如果是拿基因全长，那应该做race

race试剂盒比较贵，要是万一做不出来，就没法跟老师交代啊！我一个师兄就用walking把基因全长给扩出来了。
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5楼2014-05-11 21:32:49
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