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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有cds序列和全基因组序列,如何设计引物来克隆和表达!
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ouis歪歪

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
well_想太多(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:36:58
well_想太多: 金币+1, ★有帮助 2014-07-18 11:49:01
先看酶基因和菌基因有不有相同的单一酶切位点，没有就要创建或者多扩一些序列看看
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11楼2014-07-17 12:17:31
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
well_想太多(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-18 10:37:09
扩增CDS，连接到载体上，利用载体的启动子转录。
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12楼2014-07-17 16:31:49
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by hajierlove at 2014-07-17 11:26:18
楼主，help,克隆的引物，从ATG开始发夹结构，往前走一段，大致走多少个合适引物20bp往前走了12bp是不是走的有点多，...

不多  先做吧 这样的话测序预留一点   从ATG发夹结构是什么意思啊？
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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
13楼2014-07-17 17:01:05
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-17 17:01:05
不多  先做吧 这样的话测序预留一点   从ATG发夹结构是什么意思啊？...

不好意思，表达不够清楚，就是说，楼主帮忙看这个帖子http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7667445&pid=10#pid10
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踏实
14楼2014-07-17 20:05:11
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by ouis歪歪 at 2014-07-17 12:17:31
先看酶基因和菌基因有不有相同的单一酶切位点，没有就要创建或者多扩一些序列看看

我现在往cds序列前后各找了100bp序列,然后设计引物,我把正引物光标放在第一个碱基的位置,下游引物光标放在最后碱基处,得到的引物分数很低,应该怎么修改呢?
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15楼2014-07-18 11:48:52
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well_想太多

新虫 (小有名气)
这是我前后各找100bp后设计的引物,没加上酶切位点呢,第二个图是ncbi blst之后的分析,不是很明白,请大家帮看看
有cds序列和全基因组序列,如何设计引物来克隆和表达!
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有cds序列和全基因组序列,如何设计引物来克隆和表达!-1
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16楼2014-07-18 17:13:04
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ffzhb123

新虫 (初入文坛)
你好，我也是要对一个酶基因进行克隆，全基因测序已经完成，预测到了这个酶基因，对于设计引物这方面实在是不了解，希望可以交流一下
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17楼2016-03-14 09:51:53
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爱笑的芳宝8

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-16 01:49:44
一般 启动子在起始密码子前找。cds区克隆先提rna逆转录，设计cds区引物来pcr然后粗略的测测序有个底，然后通过T载体连接到质粒上，最后导入目的菌里面表达，然后提出表达物来验证！大概思路是这样子的。欢迎交流，我 ...

你好，我也是做真核生物启动子功能分析的，请问您提rna逆转录是什么意思？

发自小木虫Android客户端
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18楼2017-02-21 19:39:27
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