应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有cds序列和全基因组序列,如何设计引物来克隆和表达!
52/1返回列表
查看: 5561  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] 有cds序列和全基因组序列,如何设计引物来克隆和表达! 已有4人参与

我想对一个酶基因进行克隆和表达,现在知道这个酶基因的cds序列,以及这个菌的基因组序列,请问如果我想得到这个基因,在设计引物的时候应该怎么做?这方面我是菜鸟,本来就想用这个cds序列两端设计引物的,但是看大家有的说什么要找到保守序列,也有的说只用cds序列就行,只用cds的话以后会不会影响到表达呢?哎呀,我说的没有条理,见谅啊,大家放假了,实在心里很着急,还望高手给予指导!越详细越好!
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-07-15 21:10:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱笑的芳宝8

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 未婚 at 2014-07-16 01:49:44
一般 启动子在起始密码子前找。cds区克隆先提rna逆转录，设计cds区引物来pcr然后粗略的测测序有个底，然后通过T载体连接到质粒上，最后导入目的菌里面表达，然后提出表达物来验证！大概思路是这样子的。欢迎交流，我 ...

你好，我也是做真核生物启动子功能分析的，请问您提rna逆转录是什么意思？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2017-02-21 19:39:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

古木宁天

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-07-16 08:35:44
主要看你的菌株，如果你要用的菌上有启动子序列，就不需要考虑保守序列，
赞一下 回复此楼
懒
2楼2014-07-15 21:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 古木宁天 at 2014-07-15 21:27:01
主要看你的菌株，如果你要用的菌上有启动子序列，就不需要考虑保守序列，

怎么看启动子序列呢?是在cds序列上找还是在cds序列往前一段碱基上找呢?
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-15 21:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-16 08:35:49
well_想太多: 金币+1, ★有帮助 2014-07-16 09:54:58
一般 启动子在起始密码子前找。cds区克隆先提rna逆转录，设计cds区引物来pcr然后粗略的测测序有个底，然后通过T载体连接到质粒上，最后导入目的菌里面表达，然后提出表达物来验证！大概思路是这样子的。欢迎交流，我也做cds区克隆

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
4楼2014-07-16 01:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭