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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于cDNA的疑惑
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

[求助] 关于cDNA的疑惑

菜鸟一枚，请教一下高手们：
1、RT-PCR 常用模板有细胞总RNA或从总RNA分离纯化的mRNA ，请问什么时候用总RNA什么时候合适用mRNA ，两种模板各有什么优势和缺点，各针对什么目的？
2、我在看文献时，有的是直接从从cDNA 序列中找到基因再克隆表达，有的构建了cDNA 文库，请问二者的区别，什么情况下需要构建cDNA 文库呢？
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1楼 2013-04-18 15:55:16
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新人小玥

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-19 08:41:39
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-22 17:28:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-18 21:02:45
那什么样要求的实验才要用纯mRNA ?...

就我所知，一般提取纯的mRNA是用来建转录RNA库的，一般用于测序。因为我们所提取的RNA中90%-98%都是rRNA，这样在测序时扑获到都是rRNA，而mRNA很难得到，就需要将mRNA提取出来。
而一般进行基因克隆的时候，所翻转的模板是由mRNA组成的，原因是只有mRNA才具有polyA尾，单链等特殊结构。我们所用的反转试剂盒就是利用这些性质来得到cDNA。
呵呵，不知道回答的对不对啦，自己一点见解
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7楼2013-04-19 00:12:24
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2013-04-18 20:26:03
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-18 20:11:40
一般来说都是提取总RNA 然后反转cDNA 在进行克隆；除非特殊要求的实验才用纯mRNA。
其实上无论是总RNA 反转得到的cDNA  还是纯mRNA反转得到的cDNA  都应该是文库，因为理论上里面都包括了所有基因的cDNA    个人觉得可以称为库
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2楼2013-04-18 19:17:27
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA来源的是cDNA文库。
2. 以总RNA来源的是基因组DNA文库。


库 库  专业点好不好，你以为是优衣裤啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!这种答案都被采纳。小木虫让人捉急啊

基因组DNA文库是直接从提取DNA来的吧，为啥还绕弯从总RNA出发？
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4楼2013-04-18 21:02:08
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sl35537417 at 2013-04-18 19:17:27
一般来说都是提取总RNA 然后反转cDNA 在进行克隆；除非特殊要求的实验才用纯mRNA。
其实上无论是总RNA 反转得到的cDNA  还是纯mRNA反转得到的cDNA  都应该是文库，因为理论上里面都包括了所有基因的cDNA    个人觉 ...

那什么样要求的实验才要用纯mRNA ?
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5楼2013-04-18 21:02:45
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新人小玥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA来源的是cDNA文库。
2. 以总RNA来源的是基因组DNA文库。


库 库  专业点好不好，你以为是优衣裤啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!这种答案都被采纳。小木虫让人捉急啊

什么啊啊啊啊啊，总RNA是基因组文库，那用DNA建的叫啥库？？？？？
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6楼2013-04-19 00:06:23
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 00:12:24
就我所知，一般提取纯的mRNA是用来建转录RNA库的，一般用于测序。因为我们所提取的RNA中90%-98%都是rRNA，这样在测序时扑获到都是rRNA，而mRNA很难得到，就需要将mRNA提取出来。
而一般进行基因克隆的时候，所翻转 ...

谢谢！从我的目的来看，我是要得到某种微生物里面的酶，而这个微生物的基因序列未知。我从提取mRNA、建cDNA 文库出发，比从提取DNA出发构建基因组文库，要更合适些，不知道是不是可以这样理解？
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8楼2013-04-19 08:39:28
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sl35537417

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA来源的是cDNA文库。
2. 以总RNA来源的是基因组DNA文库。


库 库  专业点好不好，你以为是优衣裤啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!这种答案都被采纳。小木虫让人捉急啊

不懂不要瞎说 不要误人 ok？ 基因组DNA文库  你自己去查一下是什么
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9楼2013-04-19 09:14:56
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sl35537417

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-18 21:02:45
那什么样要求的实验才要用纯mRNA ?...

sorry 我没接触过这类实验  不过貌似有专门纯化mRNA的盒子 所以应该有这类实验
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10楼2013-04-19 09:16:17
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