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关于cDNA的疑惑
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菜鸟一枚，请教一下高手们： 1、RT-PCR 常用模板有细胞总RNA或从总RNA分离纯化的mRNA ，请问什么时候用总RNA什么时候合适用mRNA ，两种模板各有什么优势和缺点，各针对什么目的？ 2、我在看文献时，有的是直接从从cDNA 序列中找到基因再克隆表达，有的构建了cDNA 文库，请问二者的区别，什么情况下需要构建cDNA 文库呢？ |
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就我所知，一般提取纯的mRNA是用来建转录RNA库的，一般用于测序。因为我们所提取的RNA中90%-98%都是rRNA，这样在测序时扑获到都是rRNA，而mRNA很难得到，就需要将mRNA提取出来。 而一般进行基因克隆的时候，所翻转的模板是由mRNA组成的，原因是只有mRNA才具有polyA尾，单链等特殊结构。我们所用的反转试剂盒就是利用这些性质来得到cDNA。 呵呵，不知道回答的对不对啦，自己一点见解 |
7楼2013-04-19 00:12:24
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3楼2013-04-18 20:26:03
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