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cs2951819银虫 (小有名气)
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[求助]
RT-PCR引物设计小白求问 已有1人参与
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我已知一个基因的mRNA序列，现在我想根据mRNA序列，最终得到DNA序列，并做表达，那么我做RT-PCR，根据mRNA设计引物，5’和3’端的引物分别是什么呢？ 5’端引物和mRNA是互补，3’端引物和mRNA序列一致？比如我随便举个mRNA序列例子，如下：TTCCCGAGCTCACCTTCCAGCCCAGCCCCGCCCCCGACCCGCCTGGCGGCCTCACCTACTTTCCCGTGGCCGACCTGTCTATCATCGCCGCCCTCTATGCCCGCTTCACCGCCCAGATCCGAGGCGCCGTCGACCTGTCCCTCTATCC，求大神告知，两个引物大概应该是什么样的？ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
cs2951819: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-01 15:39:32
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cs2951819: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-01 15:39:32
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首先，你说的mRNA应该是某基因的表达标签，完整的EST应该包含有CDS全长和5’-、3’-UTR区域。这个通常需要用你材料的cDNA为模板扩增。 至于引物，找到你的模板序列，一般用primer premier软件进行设计。设计出来的引物，通俗点说，你应该发现其正向引物与模板中某一段一致，反向引物与模板中某一段反向互补。这两个引物之间即是你要扩增的片段。 做定量表达，其长度最好在80-250 bp之间，并且靠近3’-UTR区，设计两对引物最好。 |
2楼2015-06-01 14:40:19
cs2951819
银虫 (小有名气)
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3楼2015-06-01 15:39:33
130