应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请分子生物学高手帮忙看看下面的PCR体系...
141/2返回列表12下一页
查看: 1476  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1279341226

新虫 (初入文坛)

[求助] 请分子生物学高手帮忙看看下面的PCR体系... 已有4人参与

Each primer pair was used in 20 μl  volume reactions containing 300 nM dNTPs (Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland),1×DNA pol buffer (Biotools BandM labs S.A., Madrid, Spain),
3 mM MgCl2 (Biotools), 0.75  μ DNA polymerase (Biotools), 10 pmol each primer (depending on marker), and 10 ng of total DNA.
       本人在用通用引物 LCO1498 and HCO2198 扩寄生蜂线粒体基因 coi ，无奈老是做不出来，想按照文献上别人的方法试试，可是体系怎么看不懂呢，括号后面的是生物公司还是某什么啊，我用的是TaKaRa 公司的酶( 5U/ μl )，10×PCR Buffer( with Mg2+ ) , dNTP Mixture（各 2.5 mM),  他们用的试剂可以在哪个公司订到吗？急！急！！急！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-03 17:53:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chiangscn

银虫 (正式写手)
真是笑话，做个PCR难道还要把那个牌子的试剂？ 最可能的问题来自引物的特异性（与质量）与退火温度。可以试着进行二次扩增。
赞一下(1人) 回复此楼
wholaughslastlaughsbest
7楼2015-04-07 08:38:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

普通的Taq DNA聚合酶可能不能达到扩增的效果，选酶还是很重要的http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html写的挺好的，呵呵，我们都是用热启动聚合酶，感觉很好，我现在也在找其他的酶，想尝试高保真酶，或是能进行长片段PCR的，你的这个体系看不出有什么问题啊，你应该把你的扩增结果发上来，出现什么问题了，也许那样解决会更好
赞一下(1人) 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-04-07 11:21:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2015-04-03 23:07:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2015-04-03 23:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1279341226

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-04-03 23:07:46
额，论坛是怎么了，怎么那么冷清。我是复制查看了一下你说的括号里面的东西，应该是产地和公司之类的吧
你写出来的是产品的说明书么。扩增不出来，看你用的是什么聚合酶，建议是看看说明书

不是说明书，是看的文献里面人家的体系，我用的是TaKaRa普通酶，曾按照酶说明书上的体系试过，还是做不出来啊，忧伤额。。。
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-06 20:35:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主可以看看我的PCR体系，基本上我的体系都是这样
10xbuffer （含mg2+ 1.5mM）            2ul
dNTP （10 mM）                            0.5ul
primer1 （10 uM）                         0.5ul
primer2 （10 uM）                         0.5ul
template （基因组DNA）                100ng
TAQ                                              1U
H2O   TO                                     20ul
mg的含量可以根据条件来变化，从1.5mM到5mM都可以，酶的多少看你的购买的公司的酶的浓度。
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-07 04:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

基本不用参考文献的PCR体系，只要引物序列一样，模版一样就可以，你需要关注的是你自己用的酶的条件，楼上问了什么酶，楼主却只说takara，说明楼主对PCR酶了解不多，PCR用的酶有很多种，有容易扩增的easytaq、高保真的PFU等等，根据目的选用不同的酶，看清楚厂家的说明书、再优化退火温度，祝好！
赞一下 回复此楼
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
6楼2015-04-07 08:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1279341226

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hkj710 at 2015-04-07 04:12:39
楼主可以看看我的PCR体系，基本上我的体系都是这样
10xbuffer （含mg2+ 1.5mM）            2ul
dNTP （10 mM）                            0.5ul
primer1 （10 uM）                         0.5ul
primer2 （ ...

好的，我试试，多谢啦~~~~
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-07 17:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1279341226

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dehong1573 at 2015-04-07 08:17:14
基本不用参考文献的PCR体系，只要引物序列一样，模版一样就可以，你需要关注的是你自己用的酶的条件，楼上问了什么酶，楼主却只说takara，说明楼主对PCR酶了解不多，PCR用的酶有很多种，有容易扩增的easytaq、高保真 ...

那我这种情况用哪种酶比较好呢，首先虫子太小，都是单头无损伤提取的，可能得到的模板浓度也比较低，扩增核基因 28s 很容易，但是要扩增的另一段线粒体基因 coi 就不行，可能线粒体基因要求的模板浓度比较高吧，总之就是扩不出来呀。。
赞一下 回复此楼
10楼2015-04-07 17:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1279341226 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭