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新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 3535880
注册: 2014-11-14
专业: 农业昆虫学

[求助] 请分子生物学高手帮忙看看下面的PCR体系... 已有4人参与

Each primer pair was used in 20 μl  volume reactions containing 300 nM dNTPs (Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland),1×DNA pol buffer (Biotools BandM labs S.A., Madrid, Spain),
3 mM MgCl2 (Biotools), 0.75  μ DNA polymerase (Biotools), 10 pmol each primer (depending on marker), and 10 ng of total DNA.
   本人在用通用引物 LCO1498 and HCO2198 扩寄生蜂线粒体基因 coi ，无奈老是做不出来，想按照文献上别人的方法试试，可是体系怎么看不懂呢，括号后面的是生物公司还是某什么啊，我用的是TaKaRa 公司的酶( 5U/ μl )，10×PCR Buffer( with Mg2+ ) , dNTP Mixture（各 2.5 mM),  他们用的试剂可以在哪个公司订到吗？急！急！！急！！！

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1楼 2015-04-03 17:53:51

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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

应助: 62 (初中生)
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性别: GG
专业: 病原细菌与放线菌生物学

【答案】应助回帖

基本不用参考文献的PCR体系，只要引物序列一样，模版一样就可以，你需要关注的是你自己用的酶的条件，楼上问了什么酶，楼主却只说takara，说明楼主对PCR酶了解不多，PCR用的酶有很多种，有容易扩增的easytaq、高保真的PFU等等，根据目的选用不同的酶，看清楚厂家的说明书、再优化退火温度，祝好！