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1279341226

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by chiangscn at 2015-04-07 08:38:17
真是笑话,做个PCR难道还要把那个牌子的试剂? 最可能的问题来自引物的特异性(与质量)与退火温度。可以试着进行二次扩增。

我是实在没办法了,好像所有的方法都试过了,还是不行,二次扩增不是得先扩出来目的条带吗
11楼2015-04-07 17:34:42
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骚年的奋斗

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 1279341226 at 2015-04-07 17:10:51
好的,我试试,多谢啦~~~~...

感觉模板的量有点多了20微升体系的话,20纳克足够了
保持清醒
12楼2015-04-07 18:52:52
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

引用回帖:
2楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-04-03 23:07:46
额,论坛是怎么了,怎么那么冷清。我是复制查看了一下你说的括号里面的东西,应该是产地和公司之类的吧
你写出来的是产品的说明书么。扩增不出来,看你用的是什么聚合酶,建议是看看说明书

您好,因为选酶也是很关键的,光看酶的说明书,操作是对了,但是本身用的酶就不合适,只是看到了一个较好的页面而已,针对说明长度的一般都是要注意的,难道有什么问题吗?看说明书,我们也是看说明书啊
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
13楼2015-04-13 10:52:57
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jcj723

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 1279341226 at 2015-04-07 17:22:31
那我这种情况用哪种酶比较好呢,首先虫子太小,都是单头无损伤提取的,可能得到的模板浓度也比较低,扩增核基因 28s 很容易,但是要扩增的另一段线粒体基因 coi 就不行,可能线粒体基因要求的模板浓度比较高吧,总 ...

你用TAKARA的PrimeSTAR酶来扩增,做个预实验来确定退火温度,退火温度范围设定在50到60之间,你加样时竖着加,A1到H1,竖着放进PCR仪,这样从A1孔到H1孔的温度是按等差数列来的,到时候点样看看那个孔有条带,那么你就可以用那个温度进行后续实验了
14楼2015-04-13 11:33:53
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