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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请分子生物学高手帮忙看看下面的PCR体系...
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1279341226

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by chiangscn at 2015-04-07 08:38:17
真是笑话，做个PCR难道还要把那个牌子的试剂？ 最可能的问题来自引物的特异性（与质量）与退火温度。可以试着进行二次扩增。

我是实在没办法了，好像所有的方法都试过了，还是不行，二次扩增不是得先扩出来目的条带吗
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11楼2015-04-07 17:34:42
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骚年的奋斗

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 1279341226 at 2015-04-07 17:10:51
好的，我试试，多谢啦~~~~...

感觉模板的量有点多了20微升体系的话，20纳克足够了
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保持清醒
12楼2015-04-07 18:52:52
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-04-03 23:07:46
额，论坛是怎么了，怎么那么冷清。我是复制查看了一下你说的括号里面的东西，应该是产地和公司之类的吧
你写出来的是产品的说明书么。扩增不出来，看你用的是什么聚合酶，建议是看看说明书

您好，因为选酶也是很关键的，光看酶的说明书，操作是对了，但是本身用的酶就不合适，只是看到了一个较好的页面而已，针对说明长度的一般都是要注意的，难道有什么问题吗？看说明书，我们也是看说明书啊
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
13楼2015-04-13 10:52:57
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jcj723

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 1279341226 at 2015-04-07 17:22:31
那我这种情况用哪种酶比较好呢，首先虫子太小，都是单头无损伤提取的，可能得到的模板浓度也比较低，扩增核基因 28s 很容易，但是要扩增的另一段线粒体基因 coi 就不行，可能线粒体基因要求的模板浓度比较高吧，总 ...

你用TAKARA的PrimeSTAR酶来扩增，做个预实验来确定退火温度，退火温度范围设定在50到60之间，你加样时竖着加，A1到H1，竖着放进PCR仪，这样从A1孔到H1孔的温度是按等差数列来的，到时候点样看看那个孔有条带，那么你就可以用那个温度进行后续实验了
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14楼2015-04-13 11:33:53
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