应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白上清表达无活性，求复性方法
131/2返回列表12下一页
查看: 2212  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

linden00

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白上清表达无活性，求复性方法 已有2人参与

我的蛋白在上清中有大量表达，但是做EMSA检测无活性，看文献中是降低盐酸胍浓度来复性的。有没有人做过柱上复性的？想知道具体方法。我是应该直接按包涵体的方法复性还是上清在镍柱纯化的同时复性呢？另外蛋白中有几个半胱氨酸，没有二硫键，是不是一定要加巯基乙醇来保护巯基？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-26 11:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qc程程
2楼2015-05-26 15:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
纳尼，在上清中不就是可溶的么？  你复性也是为了可溶呀？这不是画蛇添足么。
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-26 15:42:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linden00

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by viki_MDK at 2015-05-26 15:42:07
纳尼，在上清中不就是可溶的么？  你复性也是为了可溶呀？这不是画蛇添足么。

但是上清无活性呀
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-26 17:11:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
linden00: 金币+10 2015-05-27 10:04:33
如果是核酸结合蛋白，有没有考虑到buffer不适当，并不是蛋白没有活性？

比如加入10 mM Mg ++ ,  10 uM Zn ++?
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
5楼2015-05-26 19:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linden00

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2015-05-26 19:28:31
如果是核酸结合蛋白，有没有考虑到buffer不适当，并不是蛋白没有活性？

比如加入10 mM Mg ++ ,  10 uM Zn ++?

有按参考文献加入镁离子，不知道是不是没有加还原剂保护巯基的原因，如果需要加还原剂一般是多大浓度
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-26 19:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

方便的话，站内给我你的蛋白序列或者文献
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
7楼2015-05-26 19:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
能表达到上清中，应该不是包涵体吧，为什么要复性，应该考虑是不是其他方面影响了酶的活性？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
8楼2015-05-27 15:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qc程程
9楼2015-05-28 09:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lha123

铜虫 (小有名气)
采用的是大肠杆菌表达的吧，蛋白没有活性可能是由于蛋白需要修饰，采用其他的表达体系如酵母表达可以试试啊
赞一下 回复此楼
加油！2015
10楼2015-06-03 10:36:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linden00 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 13/650 2026-08-09 19:04 by 天神眷顾
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:19 by oEVWOejN9taj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭