| 查看: 3633 | 回复: 9 | ||||
[求助]
原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办
|
| 本人老板现在让我师兄做原核表达 目标蛋白68kD(531aa) 用的PET-28a表达载体 做了好久一直只能在37℃用0.4M IPTG条件下诱导出来 并且只能在沉淀中检测出来 但最近37℃沉淀中也检测不到目标蛋白 请各位大神帮忙分析一下可能的原因 顺便介绍下怎样才能让它表达出可溶性的蛋白比如优化条件 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 | 细胞生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有90人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达 蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊
已经有12人回复
- 蛋白放置一段时间后出现沉淀的问题
已经有11人回复
- 如何鉴定一个蛋白是AKT激酶的底物
已经有15人回复
- 冷乙醇沉淀蛋白原理，如何操作
已经有5人回复
- 亲们，你们的包涵体蛋白透析会出现沉淀么，郁闷啊，能不能给只个招？？？
已经有5人回复
- 共表达载体只表达出一个蛋白
已经有21人回复
- 求解蛋白酶测定过程中滴加碳酸钠后出现沉淀，附详细过程~~~
已经有3人回复
- 超声波清洗仪可以用来裂解蛋白（丙酮沉淀离心后的）助溶吗？？会降解蛋白吗？
已经有10人回复
- 蛋白质表达沉淀如何定量？
已经有8人回复
- 求《安全血液和血液制品》原本或相关题库
已经有4人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 【求助/交流】为什么蛋白电泳时样品煮沸后变澄清，上样后又立刻出现沉淀
已经有4人回复
- 【求助/交流】【求助】考马斯亮蓝测蛋白出现絮状沉淀
已经有14人回复
- 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？
已经有19人回复
- 【求助/交流】TCA法沉淀蛋白量少怎么办
已经有3人回复
sunpeng9907
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 437.5
- 帖子: 200
- 在线: 29.4小时
- 虫号: 1664306
- 注册: 2012-03-04
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2013-10-06 17:20:54
John_Chen
银虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 372.7
- 散金: 2
- 帖子: 89
- 在线: 15.4小时
- 虫号: 2665981
- 注册: 2013-09-19
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2013-10-06 17:52:39
4楼2013-10-06 20:04:49
joan198108
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 107 (高中生)
- 金币: 6525.2
- 散金: 12
- 红花: 3
- 帖子: 842
- 在线: 413.5小时
- 虫号: 859607
- 注册: 2009-09-29
- 性别: GG
- 专业: 生物技术药物
5楼2013-10-07 08:47:33
6楼2013-10-07 11:05:24
7楼2013-10-07 21:25:25
sunpeng9907
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 437.5
- 帖子: 200
- 在线: 29.4小时
- 虫号: 1664306
- 注册: 2012-03-04
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2013-10-07 22:24:47
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
|
原核细胞的表达产物蛋白质表达量过大或者折叠异常引起产物形成沉淀，如果再明显一些就形成了砂粒状的包涵体。 防止包涵体形成的方法，楼主都可以用上。 防止包涵体出现常用的方法： 1.降低重组菌的生长温度是防止包涵体出现最常用的方法。低生长温度降低了无活性的聚集体的形成的速率和疏水相互作用；细菌生长缓慢溶氧水平降低，也可以减少包涵体的形成。2.在培养重组菌时提供丰富的培养，创造最好的培养条件，如：供氧充足、合适的pH值等，以减少包涵体的形成。3.添加可促进重组蛋白质可溶性表达生长添加剂，增加细胞的渗透压。4.在低浓度的诱导剂条件下培养重组菌，减少重组蛋白质的表达量，也可减少包涵体的形成。5.利用硫氧还原蛋白融合表达或与目标蛋白质共表达，得到可溶性的蛋白质。6.筛选合适的宿主菌，使表达的重组蛋白质可溶。7.与目标蛋白质共表达某些能够在目标蛋白质折叠过程中起作用的分子伴侣，得到可溶性的蛋白质。 不过，形成沉淀也不完全是坏事，比如分离提纯可能比较容易了。 至于从沉淀中获得活性蛋白质的方法，只要参照包涵体复性的试验方法即可，也就是变性剂溶解沉淀物，然后进行稀释，并用超滤或者层析除去变性剂。 Purification of inclusion bodies and refolding of proteins http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html |
9楼2013-10-08 01:08:19
10楼2014-04-15 14:32:28
