应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办
51/1返回列表
查看: 3521  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

云中风华

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办

本人老板现在让我师兄做原核表达  目标蛋白68kD(531aa) 用的PET-28a表达载体   做了好久一直只能在37℃用0.4M IPTG条件下诱导出来  并且只能在沉淀中检测出来  但最近37℃沉淀中也检测不到目标蛋白   请各位大神帮忙分析一下可能的原因  顺便介绍下怎样才能让它表达出可溶性的蛋白比如优化条件
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 细胞生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-06 16:49:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

云中风华

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qapollo at 2013-10-06 20:04:49
目标蛋白是什么物种的？如果你用原核表达真核生物的蛋白基本都是没有活性的，因为原核生物没有分子伴侣不能正确折叠。也许是因为折叠不正确导致蛋白的亲水能力下降才沉淀。你可以试试放到酵母里表达，也许就有可溶性 ...

目标蛋白是家蚕的类胡萝卜素基因。。。本人觉得想要获得有活性的蛋白用原核表达可能性不大，敢问酵母这个复杂吗？那块可以看到具体的方案   谢谢了
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-07 21:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

sunpeng9907

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-06 18:07:09
云中风华: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-07 21:21:04
N端加信号肽，探索诱导温度及诱导时间。
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-06 17:20:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

John_Chen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-06 18:07:18
云中风华: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-07 21:21:22
建议：（1）改变诱导温度和IPTG浓度
（2）换载体，如GST标签的载体
祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
勤能补拙
3楼2013-10-06 17:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
云中风华: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-07 21:22:14
目标蛋白是什么物种的？如果你用原核表达真核生物的蛋白基本都是没有活性的，因为原核生物没有分子伴侣不能正确折叠。也许是因为折叠不正确导致蛋白的亲水能力下降才沉淀。你可以试试放到酵母里表达，也许就有可溶性的蛋白表达出来了。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-06 20:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭