应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办
51/1返回列表
查看: 3999  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

云中风华

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办

本人老板现在让我师兄做原核表达  目标蛋白68kD(531aa) 用的PET-28a表达载体   做了好久一直只能在37℃用0.4M IPTG条件下诱导出来  并且只能在沉淀中检测出来  但最近37℃沉淀中也检测不到目标蛋白   请各位大神帮忙分析一下可能的原因  顺便介绍下怎样才能让它表达出可溶性的蛋白比如优化条件
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 细胞生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-06 16:49:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
原核细胞的表达产物蛋白质表达量过大或者折叠异常引起产物形成沉淀，如果再明显一些就形成了砂粒状的包涵体。

防止包涵体形成的方法，楼主都可以用上。

防止包涵体出现常用的方法：

1.降低重组菌的生长温度是防止包涵体出现最常用的方法。低生长温度降低了无活性的聚集体的形成的速率和疏水相互作用；细菌生长缓慢溶氧水平降低，也可以减少包涵体的形成。2.在培养重组菌时提供丰富的培养，创造最好的培养条件，如：供氧充足、合适的pH值等，以减少包涵体的形成。3.添加可促进重组蛋白质可溶性表达生长添加剂，增加细胞的渗透压。4.在低浓度的诱导剂条件下培养重组菌，减少重组蛋白质的表达量，也可减少包涵体的形成。5.利用硫氧还原蛋白融合表达或与目标蛋白质共表达，得到可溶性的蛋白质。6.筛选合适的宿主菌，使表达的重组蛋白质可溶。7.与目标蛋白质共表达某些能够在目标蛋白质折叠过程中起作用的分子伴侣，得到可溶性的蛋白质。

不过，形成沉淀也不完全是坏事，比如分离提纯可能比较容易了。

至于从沉淀中获得活性蛋白质的方法，只要参照包涵体复性的试验方法即可，也就是变性剂溶解沉淀物，然后进行稀释，并用超滤或者层析除去变性剂。

Purification of inclusion bodies and refolding of proteins
http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2013-10-08 01:08:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

sunpeng9907

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-06 18:07:09
云中风华: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-07 21:21:04
N端加信号肽，探索诱导温度及诱导时间。
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-06 17:20:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

John_Chen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-06 18:07:18
云中风华: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-07 21:21:22
建议：（1）改变诱导温度和IPTG浓度
（2）换载体，如GST标签的载体
祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
勤能补拙
3楼2013-10-06 17:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
云中风华: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-07 21:22:14
目标蛋白是什么物种的？如果你用原核表达真核生物的蛋白基本都是没有活性的，因为原核生物没有分子伴侣不能正确折叠。也许是因为折叠不正确导致蛋白的亲水能力下降才沉淀。你可以试试放到酵母里表达，也许就有可溶性的蛋白表达出来了。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-06 20:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 7/350 2026-08-19 10:48 by bugaboo
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +10 基诺咪客 2026-08-17 14/700 2026-08-19 10:34 by 基诺咪客
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +7 kkkl_v 2026-08-19 7/350 2026-08-19 10:28 by pfeng
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +4 ziyangfang 2026-08-19 4/200 2026-08-19 10:23 by JChen2024
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +52 医学老男孩 2026-08-13 114/5700 2026-08-19 09:38 by 医学老男孩
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +4 Tide man 2026-08-12 5/250 2026-08-19 07:41 by 201120518022
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭