24小时热门版块排行榜    

查看: 2080  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

linden00

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白上清表达无活性,求复性方法 已有2人参与

我的蛋白在上清中有大量表达,但是做EMSA检测无活性,看文献中是降低盐酸胍浓度来复性的。有没有人做过柱上复性的?想知道具体方法。我是应该直接按包涵体的方法复性还是上清在镍柱纯化的同时复性呢?另外蛋白中有几个半胱氨酸,没有二硫键,是不是一定要加巯基乙醇来保护巯基?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linden00

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2015-05-26 19:28:31
如果是核酸结合蛋白,有没有考虑到buffer不适当,并不是蛋白没有活性?

比如加入10 mM Mg ++ ,  10 uM Zn ++?

有按参考文献加入镁离子,不知道是不是没有加还原剂保护巯基的原因,如果需要加还原剂一般是多大浓度
6楼2015-05-26 19:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
纳尼,在上清中不就是可溶的么?  你复性也是为了可溶呀?这不是画蛇添足么。
3楼2015-05-26 15:42:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linden00

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by viki_MDK at 2015-05-26 15:42:07
纳尼,在上清中不就是可溶的么?  你复性也是为了可溶呀?这不是画蛇添足么。

但是上清无活性呀
4楼2015-05-26 17:11:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
linden00: 金币+10 2015-05-27 10:04:33
如果是核酸结合蛋白,有没有考虑到buffer不适当,并不是蛋白没有活性?

比如加入10 mM Mg ++ ,  10 uM Zn ++?
行至水穷处,坐看云起时
5楼2015-05-26 19:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +3 nnnnnnn5 2026-03-25 3/150 2026-03-26 22:38 by 不吃魚的貓
[考研] 284求调剂 +9 junqihahaha 2026-03-26 10/500 2026-03-26 22:02 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 312求调剂 +8 上岸吧ZJY 2026-03-22 12/600 2026-03-26 18:49 by muchong357
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 352求调剂 +4 大米饭! 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 305分求调剂(食品工程) +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
信息提示
请填处理意见