应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白上清表达无活性，求复性方法
131/2返回列表12下一页
查看: 2134  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

linden00

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白上清表达无活性，求复性方法 已有2人参与

我的蛋白在上清中有大量表达，但是做EMSA检测无活性，看文献中是降低盐酸胍浓度来复性的。有没有人做过柱上复性的？想知道具体方法。我是应该直接按包涵体的方法复性还是上清在镍柱纯化的同时复性呢？另外蛋白中有几个半胱氨酸，没有二硫键，是不是一定要加巯基乙醇来保护巯基？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-26 11:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qc程程
2楼2015-05-26 15:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
纳尼，在上清中不就是可溶的么？  你复性也是为了可溶呀？这不是画蛇添足么。
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-26 15:42:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linden00

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by viki_MDK at 2015-05-26 15:42:07
纳尼，在上清中不就是可溶的么？  你复性也是为了可溶呀？这不是画蛇添足么。

但是上清无活性呀
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-26 17:11:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
linden00: 金币+10 2015-05-27 10:04:33
如果是核酸结合蛋白，有没有考虑到buffer不适当，并不是蛋白没有活性？

比如加入10 mM Mg ++ ,  10 uM Zn ++?
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
5楼2015-05-26 19:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linden00

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2015-05-26 19:28:31
如果是核酸结合蛋白，有没有考虑到buffer不适当，并不是蛋白没有活性？

比如加入10 mM Mg ++ ,  10 uM Zn ++?

有按参考文献加入镁离子，不知道是不是没有加还原剂保护巯基的原因，如果需要加还原剂一般是多大浓度
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-26 19:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

方便的话，站内给我你的蛋白序列或者文献
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
7楼2015-05-26 19:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
能表达到上清中，应该不是包涵体吧，为什么要复性，应该考虑是不是其他方面影响了酶的活性？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
8楼2015-05-27 15:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qc程程
9楼2015-05-28 09:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lha123

铜虫 (小有名气)
采用的是大肠杆菌表达的吧，蛋白没有活性可能是由于蛋白需要修饰，采用其他的表达体系如酵母表达可以试试啊
赞一下 回复此楼
加油！2015
10楼2015-06-03 10:36:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linden00 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26/27博士推荐 +4 1木头人13949 2026-05-13 5/250 2026-05-19 23:41 by 1木头人13949
[文学芳草园] 献血感触 +6 呀呀好傻 2026-05-19 11/550 2026-05-19 22:26 by 而立得乐
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 7/350 2026-05-19 19:23 by bencaidai
[基金申请] 2026山东省优青 +3 luckinging 2026-05-14 4/200 2026-05-19 16:15 by 52wls
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 3/150 2026-05-19 13:56 by xtlilibin
[论文投稿] Sci. Bull. 悲剧经验 +4 jyang1999 2026-05-16 4/200 2026-05-19 10:56 by maolC
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +8 1234567wang 2026-05-17 10/500 2026-05-18 18:52 by zzahkj
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[基金申请] 今年审到国自然15份，谈谈感受 +16 国自然国社科中 2026-05-17 16/800 2026-05-18 14:58 by gy116024
[硕博家园] 考博自荐 +5 科研狗111 2026-05-13 6/300 2026-05-18 11:22 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 重磅！青年科学基金项目（C类）资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 10/500 2026-05-18 07:50 by 水和泥不是水泥
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人（2026.09） +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
[有机交流] 求有机合成大神指点三硫酸乙烯酯（CAS：2793408-99-6）的合成路线 30+3 Leekmid 2026-05-13 10/500 2026-05-16 16:37 by czyzsu
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭