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[交流]
怪事，粗酶液的活性比纯化出的蛋白活性还要高 已有6人参与
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| 各位大神，最近小弟在做酶学性质相关的，发现一件怪事，粗酶液中的活性比纯化浓缩的蛋白要高出很多很多，相差了几个数量级了。本人在纯化的时候使用的His-tag，用Ni柱跑的，250mM咪唑洗脱，然后用超滤去除咪唑。整个过程都是在4度下进行的，而且保存纯酶的buffer中加不加EDTA经测试活性类似。大神们有遇到类似的情况的吗？ |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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4楼2014-04-27 09:58:05
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提高蛋白质的活性在体外大概只能够从改变溶液环境和固定化两个角度入手，多酶体系的构成除非能够检测出其在细胞内的构成（要是直接用蛋白质的协同性实验或者protein-protein interaction实验，即使是体外实验工作量也比较大，不太现实）。 多酶体系和酶的协同性的书籍不是很多，你可以查阅： 1.Jo M.Holt edits ,Methods in Enzymology Volume 380-Energetics of Biological Macromolecules(Part E),Acaemic Press,2004. 2.Peter Friedich edits,Supermolecular Enzyme Organization,Pergmon Press,1984. 可以用Key words:regulation of enzyme,activity到SCI文献中直接搜索文献。王镜岩的生物化学2002年高教出版社第三版（上册）酶的调节那部分也写了少量这方面内容。 我不是大侠。  |
6楼2014-04-27 10:55:34
7楼2014-04-27 11:08:34
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