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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 怪事，粗酶液的活性比纯化出的蛋白活性还要高
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liuyanwisdom

新虫 (初入文坛)

[交流] 怪事，粗酶液的活性比纯化出的蛋白活性还要高已有6人参与

各位大神，最近小弟在做酶学性质相关的，发现一件怪事，粗酶液中的活性比纯化浓缩的蛋白要高出很多很多，相差了几个数量级了。本人在纯化的时候使用的His-tag，用Ni柱跑的，250mM咪唑洗脱，然后用超滤去除咪唑。整个过程都是在4度下进行的，而且保存纯酶的buffer中加不加EDTA经测试活性类似。大神们有遇到类似的情况的吗？
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1楼2014-04-26 21:31:47
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
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确信你在纯化过程中酶没有变性？
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行至水穷处，坐看云起时
8楼2014-04-27 19:32:08
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这是正常的事情，因为纯化时去掉了原来的天然的酶的抑制剂，酶在天然条件下并不是一定处于最高的活性状态，有学许多时候酶的活性还被有所抑制。
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2楼2014-04-26 22:54:13
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liuyanwisdom

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-04-26 22:54:13
这是正常的事情，因为纯化时去掉了原来的天然的酶的抑制剂，酶在天然条件下并不是一定处于最高的活性状态，有学许多时候酶的活性还被有所抑制。

谢大侠捧场！可是我的酶是粗酶液中的活性比纯酶高啊，怎么去掉抑制剂活性反而下降了呢？我的导师现在也是一头雾水啊。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-04-27 00:45:34
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
抱歉！昨天我说反了，。有时候想着别的事情，回答的内容和想的不一样。

我离开忘了下线。刚上来。

我遇到过你这样的情况，是因为在纯化过程中，有些激活目标蛋白的其他的离子、小分子或者蛋白质被纯化掉了，也就是激活因子在纯过程化中被去掉了。因为这些有机或者无机因子存在时直接影响了目的蛋白质的空间构象或者形成了某种溶液中的多酶复合体，因此能够加大酶的活性。
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4楼2014-04-27 09:58:05
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