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liuyanwisdom

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[交流] 怪事，粗酶液的活性比纯化出的蛋白活性还要高已有6人参与

各位大神，最近小弟在做酶学性质相关的，发现一件怪事，粗酶液中的活性比纯化浓缩的蛋白要高出很多很多，相差了几个数量级了。本人在纯化的时候使用的His-tag，用Ni柱跑的，250mM咪唑洗脱，然后用超滤去除咪唑。整个过程都是在4度下进行的，而且保存纯酶的buffer中加不加EDTA经测试活性类似。大神们有遇到类似的情况的吗？

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1楼2014-04-26 21:31:47

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liuyanwisdom

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2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-04-26 22:54:13
这是正常的事情，因为纯化时去掉了原来的天然的酶的抑制剂，酶在天然条件下并不是一定处于最高的活性状态，有学许多时候酶的活性还被有所抑制。

谢大侠捧场！可是我的酶是粗酶液中的活性比纯酶高啊，怎么去掉抑制剂活性反而下降了呢？我的导师现在也是一头雾水啊。。。

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3楼2014-04-27 00:45:34

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4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-04-27 09:58:05
抱歉！昨天我说反了，

。有时候想着别的事情，回答的内容和想的不一样。

我离开忘了下线。刚上来。

我遇到过你这样的情况，是因为在纯化过程中，有些激活目标蛋白的其他的离子、小 ...

谢谢大侠！那请问有没有好的解决办法让纯出来的酶活性高一点呢？或者有没有相关的文献推荐阅读的呢？就快到deadline了，小弟也是想尽可能的让纯酶活性高一点啊……小弟是新人，能得到大侠的帮助真的很开心啊！最后再谢过大侠！

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5楼2014-04-27 10:35:28

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6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-04-27 10:55:34
提高蛋白质的活性在体外大概只能够从改变溶液环境和固定化两个角度入手，多酶体系的构成除非能够检测出其在细胞内的构成（要是直接用蛋白质的协同性实验或者protein-protein interaction实验，即使是体外实验工作量 ...

是大侠！谢谢指导！👍

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7楼2014-04-27 11:08:34

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