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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 中高拷贝重组载体酶切验证正确，但是提出的质粒浓度一直很低
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潇潇溪

新虫 (初入文坛)

[求助] 中高拷贝重组载体酶切验证正确，但是提出的质粒浓度一直很低 已有4人参与

一个1000bp左右的条带连接到pQE30 载体上，菌落PCR验证正确，摇菌后提取质粒浓度很淡，但是酶切验证都正确。质粒浓度一直很淡，菌划线后重新挑取单菌落再提质粒还是很淡。且此片段连接过T载体，也是一样的情况。真是从来没有见过这种情况。请各位大侠帮帮找找问题。

中高拷贝重组载体酶切验证正确，但是提出的质粒浓度一直很低
20150430 pQE30-HA1 酶切验证.jpg
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1楼 2015-05-05 13:40:42
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 潇潇溪 at 2015-05-05 16:52:35
插入1000片段应该不会造成太大的负担，以前也做过更大的，都没有问题。如果实在不行，只能加大摇菌了。谢谢哈。...

我看成10000bp了~不好意思，1000bp没有问题的，你再试一下吧
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8楼2015-05-06 09:13:07
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-05 22:36:51
潇潇溪: 金币+1, ★有帮助 2015-05-06 11:16:13
本帖内容被屏蔽
2楼2015-05-05 14:20:25
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-05 22:37:10
质粒过大影响拷贝数吧，加大一下摇菌体系，多收集几管然后合起来，浓度过低加一步沉淀
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3楼2015-05-05 15:07:31
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yzheng29

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的DNA插入片段对宿主细胞的生长有没有妨碍？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-05-05 15:17:03
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