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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » TA克隆蓝白斑问题
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syya01

木虫 (著名写手)

[求助] TA克隆蓝白斑问题 已有2人参与

TA克隆蓝白斑筛选中，载体是pGEM-T，37度过夜后所有平板都没有菌落，连阳性对照都无菌落，是感受态不行还是因为IPTG/x-gal过期了？？？
急！！！！！！
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1楼 2015-04-29 14:56:57
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
syya01: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-05 08:31:03
首先要考虑是否是板的抗性问题……
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2015-05-04 19:23:37
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yan_nie

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
syya01: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-05 08:31:11
没有克隆的原因一般是感受态细胞效率低和（／或）TA产物数量太少。IPTG／x-gal和蓝白斑的颜色有关，和转化后菌落数量无关。
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己欲立而立人，己欲达而达人。
3楼2015-05-04 20:11:37
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syya01

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangranjun at 2015-05-04 19:23:37
首先要考虑是否是板的抗性问题……

已解决，是平板的比例配错了
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4楼2015-05-05 08:30:42
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by syya01 at 2015-05-05 08:30:42
已解决，是平板的比例配错了...

楼主，我做的TA克隆，长了一片白茫茫的，也是平板的问题吗？还是抗生素失效？
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5楼2015-06-02 09:04:56
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syya01

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2015-06-02 09:04:56
楼主，我做的TA克隆，长了一片白茫茫的，也是平板的问题吗？还是抗生素失效？...

应该是抗生素失效了，你再重新配个抗生素试试
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6楼2015-06-02 10:55:18
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by syya01 at 2015-06-02 10:55:18
应该是抗生素失效了，你再重新配个抗生素试试...

昨天已经配过了，今天倒是有白斑，可是一个蓝斑都没有，就连白斑都很少，怀疑是不是感受态不好，打算换一个感受态再试试

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7楼2015-06-03 09:32:19
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syya01

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2015-06-03 09:32:19
昨天已经配过了，今天倒是有白斑，可是一个蓝斑都没有，就连白斑都很少，怀疑是不是感受态不好，打算换一个感受态再试试
...

嗯，也有可能是连接时没连好，最好所有的都重新换新的试下
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8楼2015-06-04 08:32:13
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