24小时热门版块排行榜    

查看: 2409  |  回复: 4

Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

[求助] 关于蓝白斑筛选遇到的问题,T载体不做任何处理直接转化后长篮斑是什么问题? 已有2人参与

之前做蓝白斑筛选一直没什么问题。最近做总是不出白斑,刚开始以为是pcr的问题,昨天做转化的时候将T载体什么处理都不做直接转化然后涂版,今天早上一看竟然也是一片蓝斑,和做连接之后转化的没什么区别,这是不是能说明这一批T载体不好?大神们指点一下拜谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liug268

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先,我认为不出白斑不一定不是正确的克隆,蓝白斑我现在不怎么用了,基本都是用菌落PCR筛。
其次,T载体理论上本身不能环化,如果是在抗性板子上能长出菌落就说明可能存在污染问题。
希望能帮到你
2楼2014-06-06 20:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
估计是连接的问题。
1、你克隆用的是什么酶?是不是平末端?
TA克隆平末端要加A的尾才能连上。
2、克隆产物回收,直接用水,不要用TE.
TE盐离子严重影响连接效率。
16℃连接最好3h~12h.
3楼2014-06-06 20:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hailunl at 2014-06-06 20:07:10
估计是连接的问题。
1、你克隆用的是什么酶?是不是平末端?
TA克隆平末端要加A的尾才能连上。
2、克隆产物回收,直接用水,不要用TE.
TE盐离子严重影响连接效率。
16℃连接最好3h~12h.

酶没有问题,是TAKARA的ExTaq,我试试不用TE回收吧。谢了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-06 20:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liug268 at 2014-06-06 20:06:18
首先,我认为不出白斑不一定不是正确的克隆,蓝白斑我现在不怎么用了,基本都是用菌落PCR筛。
其次,T载体理论上本身不能环化,如果是在抗性板子上能长出菌落就说明可能存在污染问题。
希望能帮到你

的确是抗性的平板上,我觉得有问题,因为之前怎么做都没有问题的

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-06-06 20:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Dylan苏木樨 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 7/350 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中,邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +4 SCSIOyxguo 2026-09-03 7/350 2026-09-05 10:39 by Honglianlian
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
请填处理意见