24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2217  |  回复: 4

Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

[求助] 关于蓝白斑筛选遇到的问题,T载体不做任何处理直接转化后长篮斑是什么问题? 已有2人参与

之前做蓝白斑筛选一直没什么问题。最近做总是不出白斑,刚开始以为是pcr的问题,昨天做转化的时候将T载体什么处理都不做直接转化然后涂版,今天早上一看竟然也是一片蓝斑,和做连接之后转化的没什么区别,这是不是能说明这一批T载体不好?大神们指点一下拜谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liug268

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先,我认为不出白斑不一定不是正确的克隆,蓝白斑我现在不怎么用了,基本都是用菌落PCR筛。
其次,T载体理论上本身不能环化,如果是在抗性板子上能长出菌落就说明可能存在污染问题。
希望能帮到你
2楼2014-06-06 20:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
估计是连接的问题。
1、你克隆用的是什么酶?是不是平末端?
TA克隆平末端要加A的尾才能连上。
2、克隆产物回收,直接用水,不要用TE.
TE盐离子严重影响连接效率。
16℃连接最好3h~12h.
3楼2014-06-06 20:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hailunl at 2014-06-06 20:07:10
估计是连接的问题。
1、你克隆用的是什么酶?是不是平末端?
TA克隆平末端要加A的尾才能连上。
2、克隆产物回收,直接用水,不要用TE.
TE盐离子严重影响连接效率。
16℃连接最好3h~12h.

酶没有问题,是TAKARA的ExTaq,我试试不用TE回收吧。谢了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-06 20:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liug268 at 2014-06-06 20:06:18
首先,我认为不出白斑不一定不是正确的克隆,蓝白斑我现在不怎么用了,基本都是用菌落PCR筛。
其次,T载体理论上本身不能环化,如果是在抗性板子上能长出菌落就说明可能存在污染问题。
希望能帮到你

的确是抗性的平板上,我觉得有问题,因为之前怎么做都没有问题的

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-06-06 20:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Dylan苏木樨 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研求调剂 +11 子木呐 2026-04-12 11/550 2026-04-13 20:22 by 学员JpLReM
[考研] 调剂 +27 不逢春 2026-04-07 28/1400 2026-04-13 20:19 by xxy88888
[考研] 一志愿2110,化学学硕310分,本科重点双非求调剂 +20 努力奋斗112 2026-04-08 20/1000 2026-04-13 14:24 by 张zhihao
[考研] 335求调剂 +18 想上岸呀!! 2026-04-12 19/950 2026-04-13 14:15 by 张zhihao
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +15 振—TZ 2026-04-10 16/800 2026-04-13 14:11 by 张zhihao
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 271求调剂 +23 2261744733 2026-04-11 23/1150 2026-04-13 08:48 by 学zh
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 295分求调剂 +13 ?要上岸? 2026-04-10 13/650 2026-04-12 15:37 by laoshidan
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 机械还有还有名额吗?太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550, 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 材料调剂 +13 汉123456 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:53 by 来看流星雨10
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见