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克隆时卡那筛选菌落 已有2人参与
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| 各位大侠，最近在做表达载体的转化，转化后涂完含卡那霉素（终浓度50ug/ml）的板，37°培养12h后长了3个菌，想着有可能是培养时间不够，又放进去培养了3h，总共15h，长出很多小菌，那3个菌长得较大，就挑菌后（挑的中等大小菌落）又过夜摇菌，挑了20个总共只摇出来1个，但没摇出来的做了pcr验证后又有目的条带，这是什么原因尼？验证了抗生素没问题，感受态没问题，是因为卡那加的太多吗？急等~~~~~~ |
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不是因为卡那加多了，而是菌株生长缓慢。这一点可以从你的平板看出来，12小时只长了三个菌落，而15小时长了很多菌落。挑斑摇菌后，只摇出一个，而其他试管中PCR检测含有目的基因，说明也是含有菌落的，只是浓度太低看不清罢了，可以适当延长摇菌的时间。 受体菌与载体之间有亲缘性的关系，对载体进行改造后，会发生亲缘性的改变，亲缘性高，载体拷贝快，受体菌生长就快，反之亦然。我在实验中也遇到过这样的问题，就是通过适当延长时间来解决的，这个跟抗生素浓度无关。 |
2楼2014-07-29 10:05:17
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8楼2014-07-31 15:29:02