24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 11017  |  回复: 16

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)


[交流] 克隆涂平板37℃培养一夜之后,菌落密密麻麻并且特别小是什么原因?

如题,我做克隆,涂完平板之后37℃过夜培养,长出的菌落都是很均一,密度很大,并且特别特别小的,做了两次了,都是这样,请问会是什么原因啊?
(我转化用的感受态是40-50ul,加800ul 不加氨苄的LB培养基或者是SOC,摇菌一个小时,4000rpm 离心1min,移走700ul上清液,第一次是吧剩下的100ul都涂板了,长得菌落太密,第二次用了50ul涂板,用的氨苄是50ug/ml终浓度。两次的摇菌一小时离心完之后都能看到很明显的沉淀,我在想是不是菌液密度太大导致的菌落长不好呢?)
求高手指点,有哪位做这一步效果比较好的,处理方法能告知的将感激不尽!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 回帖置顶 2013-12-18 18:06:20
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流! 2013-12-18 18:06:25
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:22
氨苄浓度为100ug/ml,摇菌后不要离心
9楼2013-12-18 12:29:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-12-18 18:06:15
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:07
菌涂多了。取多少菌涂板最佳与感受态里的细胞数目,感受态的活性,及转化效率都有关系,一般实验室自己做的感受态,如果控制得好,可以根据经验来,否则要自己做梯度稀释。
8楼2013-12-18 12:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:40:43
我摇菌后直接涂平板,不要涂太多。你离心后浓度肯定大了。
10楼2013-12-18 13:19:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)


昨天又做了一次实验,减小了涂板的菌液量(20ul左右),培养时间延长(20小时左右),长的菌落没有再像前两次那么密,而且大了很多,挺好挑的了。
多谢各位指教!
15楼2013-12-19 16:41:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eminem_Leon

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
应该是浓度问题 可以根据实际情况做几个梯度看看 最后选合适的浓度涂布
16楼2013-12-19 19:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

判官小艾

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:01
你可以将收集后的菌体稀释成不同的倍数,然后再涂版,50微升
2楼2013-12-18 09:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)


…………………………
3楼2013-12-18 09:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)


blessing
5楼2013-12-18 10:03:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deguohan

至尊木虫 (职业作家)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-12-18 18:06:04
原因可能有2个:一、估计是时间太短了,延长培养时间即可长大;二、也可能是长了杂菌了,建议用抗生素筛选(选的克隆载体抗该抗生素)。
6楼2013-12-18 10:17:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半生一梦

木虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流! 2013-12-18 18:06:10
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:40:51
应该是感受态制备的时候里面的菌太多了 所以复壮完会出现可见的白色沉淀
以前自己做感受态的时候都是酱紫的 第二天挑斑的时候超级痛苦啊
后来直接用买来的感受态就不会 公司在制备的时候都是控制好的 就轻松很多
7楼2013-12-18 11:42:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

食梦貊

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的也是,涂完板儿密密麻麻,但都很均一,不像杂菌。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2013-12-18 15:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
浓度太大了,稀释到10-7之后再涂板吧。
12楼2013-12-18 15:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

r-rainbow

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果转化的是质粒就是太浓了 我一般涂50微
如果是连接产物就考虑抗生素的问题 是本来就失效了还是加入的时候太热导致的失效
13楼2013-12-18 21:48:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)


你的氨苄失效了。
14楼2013-12-19 09:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zaty95

木虫 (著名写手)


可能污染了
17楼2019-09-13 00:03:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
sjmr12214楼
2013-12-18 09:59   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 柠檬可乐星 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 264求调剂 +9 麦小叮当 2026-04-07 9/450 2026-04-08 01:52 by Linzejun
[考研] 求调剂 +6 吃口冰激凌 2026-04-07 6/300 2026-04-08 01:41 by Linzejun
[考研] 0703化学调剂 348分 +10 唉我超真没招了 2026-04-06 10/500 2026-04-08 00:45 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +19 努力奋斗112 2026-04-07 20/1000 2026-04-07 23:12 by JourneyLucky
[考研] 0854电子信息319求调剂(接受跨专业调剂) +5 星星不眨眼喽 2026-04-05 6/300 2026-04-07 22:16 by hemengdong
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600,求调剂 +34 吃的不少 2026-04-02 34/1700 2026-04-07 20:01 by lrll?l
[考研] 一志愿华东理工085601材料工程303分求调剂 +8 a1708 2026-04-06 8/400 2026-04-07 11:20 by 诗与自由
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿武汉理工大学080200机械工程308分,求调剂 +4 终不似从前 2026-04-05 4/200 2026-04-06 11:46 by 考研学校招点人
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:24 by 544594351
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-02 9/450 2026-04-04 22:07 by hemengdong
[考研] 296材料专硕求调剂 +21 202451007219 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 21:48 by hemengdong
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 考研调剂 +3 Draa 2026-04-03 3/150 2026-04-03 17:37 by hgwz7468
[考研] 266求调剂 +3 08电气工程 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:05 by 1753564080
[考研] 建环,能源,土木老师路过看一看!!! +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 材料340分调剂 +7 夏夜晚风_long 2026-04-02 9/450 2026-04-02 21:20 by dongzh2009
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
信息提示
请填处理意见