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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[交流] 克隆涂平板37℃培养一夜之后，菌落密密麻麻并且特别小是什么原因？

如题，我做克隆，涂完平板之后37℃过夜培养，长出的菌落都是很均一，密度很大，并且特别特别小的，做了两次了，都是这样，请问会是什么原因啊？
（我转化用的感受态是40-50ul，加800ul 不加氨苄的LB培养基或者是SOC，摇菌一个小时，4000rpm 离心1min，移走700ul上清液，第一次是吧剩下的100ul都涂板了，长得菌落太密，第二次用了50ul涂板，用的氨苄是50ug/ml终浓度。两次的摇菌一小时离心完之后都能看到很明显的沉淀，我在想是不是菌液密度太大导致的菌落长不好呢？）
求高手指点，有哪位做这一步效果比较好的，处理方法能告知的将感激不尽！
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1楼 2013-12-18 09:01:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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amisking: 金币+1, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-12-18 18:06:15
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:07
菌涂多了。取多少菌涂板最佳与感受态里的细胞数目，感受态的活性，及转化效率都有关系，一般实验室自己做的感受态，如果控制得好，可以根据经验来，否则要自己做梯度稀释。
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8楼2013-12-18 12:14:28
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yuren2009

木虫 (正式写手)
★ ★
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柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:40:43
我摇菌后直接涂平板，不要涂太多。你离心后浓度肯定大了。
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10楼2013-12-18 13:19:29
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
昨天又做了一次实验，减小了涂板的菌液量（20ul左右），培养时间延长（20小时左右），长的菌落没有再像前两次那么密，而且大了很多，挺好挑的了。
多谢各位指教！
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15楼2013-12-19 16:41:53
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Eminem_Leon

铁虫 (初入文坛)
★
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应该是浓度问题 可以根据实际情况做几个梯度看看 最后选合适的浓度涂布
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16楼2013-12-19 19:16:59
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普通回帖

判官小艾

木虫 (正式写手)
★ ★
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柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:01
你可以将收集后的菌体稀释成不同的倍数，然后再涂版，50微升
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2楼2013-12-18 09:05:36
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jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)
…………………………
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3楼2013-12-18 09:45:03
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
blessing
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5楼2013-12-18 10:03:08
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deguohan

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
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amisking: 金币+1, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-12-18 18:06:04
原因可能有2个：一、估计是时间太短了，延长培养时间即可长大；二、也可能是长了杂菌了，建议用抗生素筛选（选的克隆载体抗该抗生素）。
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6楼2013-12-18 10:17:29
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半生一梦

木虫 (小有名气)
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！ 2013-12-18 18:06:10
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:40:51
应该是感受态制备的时候里面的菌太多了 所以复壮完会出现可见的白色沉淀
以前自己做感受态的时候都是酱紫的 第二天挑斑的时候超级痛苦啊
后来直接用买来的感受态就不会 公司在制备的时候都是控制好的 就轻松很多
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7楼2013-12-18 11:42:24
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
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amisking: 回帖置顶 2013-12-18 18:06:20
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柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:22
氨苄浓度为100ug/ml，摇菌后不要离心
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9楼2013-12-18 12:29:01
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食梦貊

新虫 (小有名气)
★
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我的也是，涂完板儿密密麻麻，但都很均一，不像杂菌。。。

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11楼2013-12-18 15:16:35
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)
★
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浓度太大了，稀释到10-7之后再涂板吧。
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12楼2013-12-18 15:21:09
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r-rainbow

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果转化的是质粒就是太浓了 我一般涂50微
如果是连接产物就考虑抗生素的问题 是本来就失效了还是加入的时候太热导致的失效
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13楼2013-12-18 21:48:52
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gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)
你的氨苄失效了。
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14楼2013-12-19 09:23:18
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zaty95

木虫 (著名写手)
可能污染了
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17楼2019-09-13 00:03:29
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简单回复
sjmr12214楼
2013-12-18 09:59   回复  
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