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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)


[交流] 克隆涂平板37℃培养一夜之后,菌落密密麻麻并且特别小是什么原因?

如题,我做克隆,涂完平板之后37℃过夜培养,长出的菌落都是很均一,密度很大,并且特别特别小的,做了两次了,都是这样,请问会是什么原因啊?
(我转化用的感受态是40-50ul,加800ul 不加氨苄的LB培养基或者是SOC,摇菌一个小时,4000rpm 离心1min,移走700ul上清液,第一次是吧剩下的100ul都涂板了,长得菌落太密,第二次用了50ul涂板,用的氨苄是50ug/ml终浓度。两次的摇菌一小时离心完之后都能看到很明显的沉淀,我在想是不是菌液密度太大导致的菌落长不好呢?)
求高手指点,有哪位做这一步效果比较好的,处理方法能告知的将感激不尽!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★
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amisking: 金币+1, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-12-18 18:06:15
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:07
菌涂多了。取多少菌涂板最佳与感受态里的细胞数目,感受态的活性,及转化效率都有关系,一般实验室自己做的感受态,如果控制得好,可以根据经验来,否则要自己做梯度稀释。
8楼2013-12-18 12:14:28
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判官小艾

木虫 (正式写手)


★ ★
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柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:01
你可以将收集后的菌体稀释成不同的倍数,然后再涂版,50微升
2楼2013-12-18 09:05:36
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jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)


…………………………
3楼2013-12-18 09:45:03
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deguohan

至尊木虫 (职业作家)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-12-18 18:06:04
原因可能有2个:一、估计是时间太短了,延长培养时间即可长大;二、也可能是长了杂菌了,建议用抗生素筛选(选的克隆载体抗该抗生素)。
6楼2013-12-18 10:17:29
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