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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆涂平板37℃培养一夜之后，菌落密密麻麻并且特别小是什么原因？
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[交流] 克隆涂平板37℃培养一夜之后，菌落密密麻麻并且特别小是什么原因？

如题，我做克隆，涂完平板之后37℃过夜培养，长出的菌落都是很均一，密度很大，并且特别特别小的，做了两次了，都是这样，请问会是什么原因啊？
（我转化用的感受态是40-50ul，加800ul 不加氨苄的LB培养基或者是SOC，摇菌一个小时，4000rpm 离心1min，移走700ul上清液，第一次是吧剩下的100ul都涂板了，长得菌落太密，第二次用了50ul涂板，用的氨苄是50ug/ml终浓度。两次的摇菌一小时离心完之后都能看到很明显的沉淀，我在想是不是菌液密度太大导致的菌落长不好呢？）
求高手指点，有哪位做这一步效果比较好的，处理方法能告知的将感激不尽！
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1楼 2013-12-18 09:01:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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amisking: 金币+1, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-12-18 18:06:15
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:07
菌涂多了。取多少菌涂板最佳与感受态里的细胞数目，感受态的活性，及转化效率都有关系，一般实验室自己做的感受态，如果控制得好，可以根据经验来，否则要自己做梯度稀释。
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8楼2013-12-18 12:14:28
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判官小艾

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-19 20:41:01
你可以将收集后的菌体稀释成不同的倍数，然后再涂版，50微升
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2楼2013-12-18 09:05:36
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jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)
…………………………
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3楼2013-12-18 09:45:03
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deguohan

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-12-18 18:06:04
原因可能有2个：一、估计是时间太短了，延长培养时间即可长大；二、也可能是长了杂菌了，建议用抗生素筛选（选的克隆载体抗该抗生素）。
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6楼2013-12-18 10:17:29
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