| 查看: 1576 | 回复: 5 | ||
[求助]
有没有什么好方法来挑选阳性克隆
|
|
最近一直在用gate way来重组pDONR质粒，两个目的片段，1个用的DNA模板是基因组基因，长6Kb左右，另一个是cDNA模板，长2Kb。 做了有半个月了，原先以为肯定是短的cDNA先做出来，没想到现在大的做出来了，2kb的片段却怎么也找不到阳性克隆。 cDNA模板浓度似乎不高，pcr产物在割胶回收后浓度一般为70-100ng/ul。BP反应后转化DHa5后板子上能长出20多个菌落，因为菌落PCR所有的菌落条带都是一样的，很多条带，其中一条比较亮，我就以为都是阳性，第二天提取质粒电泳比对大小后却发现都没插进去。 于是，又重新PCR，重新割胶回收，努力提高浓度，昨天转化完，37度培养了约16小时，今天来一看发现长出了好多菌落。大概能有上百个了，有大有小。打算下午一会儿硬着头皮再做次菌落PCR吧，可隐隐觉得结果会跟上次一样，做了也没办法分辨阳性克隆。 所以，各位高手能不能教教我怎么用肉眼分辨菌落呢？那些星星点点的菌落是不是就可以直接忽略了？一般成功率高的转化大概长几个菌落比较靠谱？菌落是不是长的越多越好？PS，我之前克隆6kb的目的片段成功的板子上一次只长了1个菌落，一次长了3个菌落。所以我现在看到越多菌落的板子心情立马不好了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有197人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 转化后涂布，阴性对照培养皿上长有一两个菌落，能否继续在阳性平皿上挑单克隆？
已经有4人回复
- 求助分子克隆问题——挑不出阳性克隆！
已经有14人回复
- 平板能长，挑单克隆却不长啊啊啊啊啊
已经有12人回复
- 克隆基因，挑克隆拿去测序，好多点突怎么办！？
已经有21人回复
- 做克隆挑斑有什么技巧吗？
已经有9人回复
- 请教一下，这是否为假阳性克隆的问题，如果是，该如何提高阳性克隆效率？
已经有20人回复
- Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题
已经有18人回复
- 阳性克隆的筛选问题
已经有15人回复
- 连接转化后挑菌落，测序是混合克隆，是怎么回事？
已经有9人回复
- 阳性克隆的菌落
已经有7人回复
- 转化后阳性克隆长得比较慢是什么原因？！
已经有18人回复
- 阳性克隆子被污染
已经有6人回复
- 微卫星标记开发过程送测序的阳性克隆如何
已经有4人回复
- 同一个平板上挑的两个菌测序，序列差很多，大家帮我看看啊，有比对图！谢谢啦
已经有18人回复
- 克隆假阳性的问题
已经有3人回复
- 亲们~谁做过酿酒酵母的转化，怎么筛选阳性克隆呢？
已经有5人回复
- 阳性克隆的鉴定问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
已经有24人回复
- 【求助/交流】连接产物电泳
已经有17人回复
- 【求助/交流】悬浮细胞 挑单克隆
已经有12人回复
2楼2013-11-15 15:12:38
3楼2013-11-15 15:43:17
感谢参与，应助指数 +1
缩++影: 屏蔽内容, 反馈回复内容有误，屏蔽。 2013-11-16 00:25:26
缩++影: 屏蔽内容, 反馈回复内容有误，屏蔽。 2013-11-16 00:25:26
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2013-11-15 23:15:34
5楼2013-11-15 23:39:41
6楼2014-08-24 11:38:04
