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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后阳性克隆长得比较慢是什么原因？！
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 转化后阳性克隆长得比较慢是什么原因？！

在做亚克隆的转化后平板上有阳性克隆，但是菌落比较小，长得比较慢，是什么原因啊？！
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1楼 2012-06-17 10:01:37
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-18 13:43:52
有可能是因为抗生素浓度太高了，菌落生长需要更长的时间。
还有一种可能就是结果是假阳性，希望楼主好运啊！
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2楼2012-06-18 10:26:14
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healerly

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2012-06-18 15:45:52
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
培养基平板是不是放的时间太长了，转化最好是用当天或者最近倒的平板，以免平板太干~~~
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4楼2012-06-18 16:18:20
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冰泉cathy at 2012-06-18 10:26:14
有可能是因为抗生素浓度太高了，菌落生长需要更长的时间。
还有一种可能就是结果是假阳性，希望楼主好运啊！

现在已经做完菌落PCR的鉴定了，是有阳性克隆的，那是不是说就是抗生素的浓度太高？
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5楼2012-06-18 16:27:26
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by healerly at 2012-06-18 15:45:52
amp浓度的原因~~~菌落小不要紧，能直接往下做，做一下鉴定，继续下一步实验呗，为什么非要让长的很大呢？

菌落小的话不是活性也比较小吗？而且转接的时候菌长得也是比较慢的啊
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6楼2012-06-18 16:28:44
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-06-18 16:18:20
培养基平板是不是放的时间太长了，转化最好是用当天或者最近倒的平板，以免平板太干~~~

平板都是最近倒的，应该不会是平板的原因吧，我用原质粒做了对照，那个长得就很快也很好的
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7楼2012-06-18 16:49:20
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

会不会是你表达的蛋白对大肠杆菌的生长有影响呢？
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8楼2012-06-18 19:20:41
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dajiong

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冰泉cathy at 2012-06-18 10:26:14
有可能是因为抗生素浓度太高了，菌落生长需要更长的时间。
还有一种可能就是结果是假阳性，希望楼主好运啊！

原来抗生素浓度高也是问题呀~难怪我的长的也会慢。不过你们一般用多少浓度的呢？我是amp：LB=1：:1000的加的，这样算不算高？
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哦也
9楼2012-06-18 22:36:19
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
9楼: Originally posted by dajiong at 2012-06-18 22:36:19
原来抗生素浓度高也是问题呀~难怪我的长的也会慢。不过你们一般用多少浓度的呢？我是amp：LB=1：:1000的加的，这样算不算高？...

Amp的保存液浓度是多少？另外菌落大小也和细胞有关系，你用的什么感受态？
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人生不是一场物质的盛宴，而是一次灵魂的修炼，使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
10楼2012-06-18 23:41:00
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