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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后阳性克隆长得比较慢是什么原因？！
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-06-18 19:20:41
会不会是你表达的蛋白对大肠杆菌的生长有影响呢？

应该不会，别人有做出来的！我在想是不是我的操作在哪个地方有什么不妥
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11楼2012-06-19 08:38:03
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by suifeng91 at 2012-06-18 23:41:00
Amp的保存液浓度是多少？另外菌落大小也和细胞有关系，你用的什么感受态？...

一般情况下Amp的浓度要多少？JM109的感受态应该不会长很慢的吧
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12楼2012-06-19 08:42:14
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

AMP终浓度50ug/ml, JM109生长应该不慢。别人用过你的板子吗？情况一样吗？
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人生不是一场物质的盛宴，而是一次灵魂的修炼，使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
13楼2012-06-19 08:47:27
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by suifeng91 at 2012-06-19 08:47:27
AMP终浓度50ug/ml, JM109生长应该不慢。别人用过你的板子吗？情况一样吗？

别人没有出现过这种情况，而且我以前做的时候也没出现过这种情况，就是最近做亚克隆要么转化后没有阳性克隆要么就是长得很慢
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14楼2012-06-19 09:09:43
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2012-06-18 16:27:26
现在已经做完菌落PCR的鉴定了，是有阳性克隆的，那是不是说就是抗生素的浓度太高？...

个人就觉得菌落PCR的成功率要在80%以上才有可以信度，因为它的准确性不是很高。测序相对来说，比菌落PCR更靠谱。
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15楼2012-06-19 09:13:00
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dajiong at 2012-06-18 22:36:19
原来抗生素浓度高也是问题呀~难怪我的长的也会慢。不过你们一般用多少浓度的呢？我是amp：LB=1：:1000的加的，这样算不算高？...

这个算正常啊，长的慢可能是抗生素浓度的问题，也有可能是平板的时间长短，插入片段对菌株的影响，以及感受态的状态啊，一系列的问题呢。
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16楼2012-06-19 09:16:06
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冰泉cathy at 2012-06-19 09:13:00
个人就觉得菌落PCR的成功率要在80%以上才有可以信度，因为它的准确性不是很高。测序相对来说，比菌落PCR更靠谱。...

我们做菌落PCR也只是先验证一下，然后就送样测序！但是菌的活性好像真的不是很高，就连摇瓶时菌浓也很低
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17楼2012-06-19 10:20:03
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

amp，一般是100mg/ml，和LB1：1000的加！
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
18楼2012-09-18 16:35:14
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该是你插入基因表达的蛋白对菌有毒性，我也有过这种情况，小的菌落是阳性，大的是自连，Amp正常工作浓度100ug/ml
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19楼2012-09-18 17:26:10
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