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honglanbai木虫 (正式写手)
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【求助/交流】悬浮细胞 挑单克隆 已有3人参与
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有谁做过悬浮细胞挑单克隆的。 1.大家都是用什么方法挑的呀，有的说用有限稀释法，有的说先稀释好一个浓度，然后铺一个孔有一个或者0.5个细胞，但是怎么才能确定一定是单克隆啊，有的时候即使你稀释的很低，也会有几个细胞在一起？ 2.96孔板一般铺完几天不动，要不要换液，几天换一次，怎么换液？ 3.有没有做过CHO-S的挑单克隆的。 4.细胞不爱活怎么办，谁有好办法吗？ |
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2楼2010-06-10 11:28:19
honglanbai
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3楼2010-06-10 15:01:34
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honglanbai(金币+1): 2010-11-08 10:11:06
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普通书上推荐的就是有限稀释法，如果你稀释之后还是有一个孔出现多个克隆的请款个，说明你在前面计数的时候不是很准确，数的太少了。另一个方面是你的细胞并没有完全分散，所以你可以铺几个不同的浓度，以保证一次试验中等到你想要的单克隆。 是否跟换培养基要依据你细胞的生长特性来判断，一般前几天不要动细胞板，避免晃动。 “细胞不爱活”不知道什么意思？我想有几个原因，有可能细胞原来状态不好 ，分散之后细胞生存能力更差了。也有可能前面状态好，但是因为细胞密度太小了，也不是很好存活等原因。你可以考虑提高培养基中营养成分或者加入一定的细胞因子或者加入一定的饲养层等方法试试。 |
4楼2010-06-11 14:01:48
honglanbai
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6楼2010-06-11 20:27:52
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