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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于悬浮细胞MTT的一点疑问，求解答！
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grace415

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于悬浮细胞MTT的一点疑问，求解答！

我想要测定药物对细胞的毒性，用MTT。
请问悬浮细胞的MTT实验时，细胞接板后培养多长时间给药呢？细胞和药物的比例大概是怎样呢？例如，每孔加100μl时，细胞悬液和药物溶液各占多少？谢谢！！
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1楼2012-12-24 14:17:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
grace415: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-26 09:55:23
引用回帖:
4楼: Originally posted by grace415 at 2012-12-24 16:15:51
嗯，我是用的MTS，就免去了离心那一步了，觉得离心比较麻烦，取上清液也怕取的参差不齐。...

那你就先按90ul细胞悬液（1000-3000细胞）铺板，24h+你药物作用时间，20ulMTS，在1-4小时摸索一下，看看490nm下的OD能不能在1附近。然后根据摸的条件做实验，铺板，24h后加药，药物作用完20%体积的MTS，然后测OD就好了，还有什么问题么？
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ForDream！
6楼2012-12-24 16:46:27
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yeyu541200

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖！ 2012-12-24 18:22:18
我没有养过悬浮细胞，只养过贴壁细胞，所以只能给你提提建议，给药时间我觉得悬浮的细胞应该是细胞长到60%以上，也就是你平常穿细胞的时间往前推2到3小时就行,.至于药物的浓度，你不是要测药物的毒性试验么，我感觉你最好做个梯度，一般都是10倍稀释，如果药物的毒性不大，就4倍稀释，对了，你药物得和细胞液配比哈，这样吧，给药的时候，你细胞让他多长长，密这点应该没事，只要不是太密，你的药用培养基稀释，今天喝的有点多，说话有点啰嗦，希望对你有帮助，祝你成功！！！
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3楼2012-12-24 15:25:00
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zhouhh2809

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
现在都用MTS试剂盒啦，方便而且价格也不贵。。。
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7楼2012-12-25 08:18:38
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普通回帖

western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
悬浮细胞铺板过24h加药或者铺完板就加药都可以，药物体积看你用什么溶的，如果培养基溶的，那影响不大，多加少加都一样，如果用PBS或者DMSO溶，那就按溶解度来，能少加就少加。关键是平行实验，加的体积要一样。做MTT，你是离心还是用改良的MTT法，直接测？
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ForDream！
2楼2012-12-24 15:14:54
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grace415

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-24 15:14:54
悬浮细胞铺板过24h加药或者铺完板就加药都可以，药物体积看你用什么溶的，如果培养基溶的，那影响不大，多加少加都一样，如果用PBS或者DMSO溶，那就按溶解度来，能少加就少加。关键是平行实验，加的体积要一样。做M ...

嗯，我是用的MTS，就免去了离心那一步了，觉得离心比较麻烦，取上清液也怕取的参差不齐。
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4楼2012-12-24 16:15:51
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grace415

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yeyu541200 at 2012-12-24 15:25:00
我没有养过悬浮细胞，只养过贴壁细胞，所以只能给你提提建议，给药时间我觉得悬浮的细胞应该是细胞长到60%以上，也就是你平常穿细胞的时间往前推2到3小时就行,.至于药物的浓度，你不是要测药物的毒性试验么，我感觉 ...

谢谢！
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5楼2012-12-24 16:22:38
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grace415

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhouhh2809 at 2012-12-25 08:18:38
现在都用MTS试剂盒啦，方便而且价格也不贵。。。

是啊~我是买的MTS的溶液
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8楼2012-12-26 09:47:18
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grace415

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-24 16:46:27
那你就先按90ul细胞悬液（1000-3000细胞）铺板，24h+你药物作用时间，20ulMTS，在1-4小时摸索一下，看看490nm下的OD能不能在1附近。然后根据摸的条件做实验，铺板，24h后加药，药物作用完20%体积的MTS，然后测OD就 ...

好的，谢谢！
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9楼2012-12-26 09:47:32
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晨基范宁

金虫 (初入文坛)
最近刚刚好想要接触细胞，看到楼主的发帖，本着学习的态度进来，学到了不少东西，谢谢上面几位的回帖~~~
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10楼2012-12-26 10:34:44
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