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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】MTT实验，24孔板接种细胞的一些疑惑
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pumpkin236

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】MTT实验，24孔板接种细胞的一些疑惑 已有13人参与

各位牛人，初涉实验时又遇到一个问题向大家请教
   准备 做细胞的MTT加药实验。用的是24孔板，但是种板后发现，细胞长的十分之不均匀，前一天下午种的板，第二条上午板孔中间长的就很密，几乎达90%，而周围十分之稀疏。请教大家，怎样在种板时让细胞在板孔中分布的均匀一点，给点切实可行的建议吧
   还有，在做MTT时，一般接种密度接种多少？我们实验室有这样接种的，可以不计数，比如T25的培养瓶长满细胞以后，在消化后，加2.5ml培养基吹打成细胞悬液，24孔板每个孔先加900微升的培养基，然后再每个板孔接种80-100微升的细胞 悬液。我试过这个方法，发现分布也有点不均！大家还有没有什么更好的方法？
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1楼 2010-09-28 10:19:41
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magiccat

木虫 (正式写手)
10的6次方/mL 不过应该用96孔板吧，要不怎么上酶标仪检测呢
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2楼2010-09-28 11:51:04
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ndwzf

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
NCI有推荐浓度，不同的细胞浓度不同。另，用96孔板较好。
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3楼2010-09-28 18:56:44
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ndwzf

铁虫 (小有名气)
想绝对均匀是不现实的
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4楼2010-09-28 18:57:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-28 22:50:37
不是没摇匀就是孔板底部不均匀~~质量次的就这样
不过，96孔板是越摇越不容易均匀的……………………

接种密度看你的实验需求~~一般40%~60%
就算你不计数，也至少种下去之后看一眼是不是合适嘛……………………不均匀跟接种密度没多大关系
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5楼2010-09-28 21:36:47
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sky-sky

金虫 (小有名气)

24孔板接种

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我现在也存在这个问题，24孔板接种中间长得特别密，不知道楼主解决这个问题没有？
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6楼2010-09-29 12:45:54
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pumpkin236

铁虫 (小有名气)
我们这酶标仪坏了，就用紫外测得，24孔板。反正感觉长的密度很不均匀，要不周围长的连成片了，要不中间连成片，有些地方又空空如野啊。。。我是先用五毫升吹打成细胞悬液，再补加培养基到25毫升，吹打，没空接种一毫升，然后用枪头吹打，反正也不是很均匀。。。
   现在还遇到一个问题就是，MTT不是中间要用无血清的培养，我换了无血清的培养基以后，细胞全死了，最后还是改成5%的，不知道影响大不大，反正最后结果没有预期的好，还是决定再做一次
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7楼2010-10-05 13:46:21
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★
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顶5楼。

摇匀就ok了嘛
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物必先腐而后虫生
8楼2010-10-05 21:02:08
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happychou

新虫 (初入文坛)
★
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用十字交叉法摇匀会使细胞密度均匀些，然后推荐用96孔板做MTT，每个孔细胞数量在1000~10000之间，一般在3000~5000适宜
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9楼2010-10-05 22:20:44
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bbcai321
★
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10楼2010-10-05 22:27:33
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