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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 96孔板做MTT时该显色的不显色，细胞污染？请求支援
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石头影子2002

木虫 (正式写手)

[交流] 96孔板做MTT时该显色的不显色，细胞污染？请求支援

初做MTT，做了3次都失败了。真是郁闷，不知道问题到底出在哪里？我最后用排枪加细胞时，是从下往上加的，最后观察细胞时发现从地5排-第8排的细胞本来应该长势良好，结果却死了。怎么回事呢？是不是手臂跨越无菌区，导致细胞染菌？请高手指点
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1楼 2011-11-28 11:37:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liyangmiscap

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
石头影子2002(金币+1):谢谢参与
jhu132llh(金币+2): good,鼓励积极应助 2011-12-01 17:39:49
首先要确认你的实验用品是否完全灭菌消毒？
细胞瓶内的细胞状态是否正常？
消化时是否时间过长，导致细胞状态不佳或是死亡
铺板前细胞悬液是否吹打均匀？
铺板后是否在显微镜下观察细胞状态和密度？
是否是加入了其他药物导致细胞死亡？
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3楼2011-11-29 13:55:49
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普通回帖

航航宝贝

银虫 (正式写手)
★
石头影子2002(金币+1):谢谢参与
送鲜花一朵
个人感觉不应该是这个原因，再找找其他方面原因
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2楼2011-11-28 13:52:50
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★
石头影子2002(金币+1):谢谢参与
细胞是不是污染是很明显的
应该不是细胞污染的问题
所以。。。。。。
你先做一组
不加药物，其他处理手段一样的的96孔板
看看细胞的生长情况
如果这个组没问题的话
可能是药物处理导致
那就需要重新调整药物的浓度
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4楼2011-11-29 15:11:30
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纳米shiny

新虫 (初入文坛)
★
石头影子2002(金币+1):谢谢参与
本人觉得是染菌了，根据楼上所说排除一下染菌的原因
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5楼2011-11-29 15:20:47
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石头影子2002

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liyangmiscap at 2011-11-29 13:55:49:
首先要确认你的实验用品是否完全灭菌消毒？
细胞瓶内的细胞状态是否正常？
消化时是否时间过长，导致细胞状态不佳或是死亡
铺板前细胞悬液是否吹打均匀？
铺板后是否在显微镜下观察细胞状态和密度？
是否是加 ...

非常感谢你的回复，细胞是UT7悬浮细胞，依赖EPO。我培养的应该正常生长的全部死了，而且做了3次情况都一样。郁闷啊
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6楼2011-11-30 09:34:26
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石头影子2002

木虫 (正式写手)
★
jhu132llh(金币+1): 鼓励积极交流 2011-12-01 17:40:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by jhu132llh at 2011-11-29 15:11:30:
细胞是不是污染是很明显的
应该不是细胞污染的问题
所以。。。。。。
你先做一组
不加药物，其他处理手段一样的的96孔板
看看细胞的生长情况
如果这个组没问题的话
可能是药物处理导致
那就需要重新调整药 ...

细胞是UT7细胞，依赖EPO生长，为了检测血清中是否有EPO中和抗体，我孔板上分了几组，空白，正常，阴性血清，阳性血清，待测血清。本来结果应该是空白细胞死亡，正常组细胞生长，阴性血清组细胞正常，阳性因为有浓度梯度，高浓度的细胞死亡，低浓度的细胞正常。可是我做的结果，正常对照细胞都死了，其它几个血清组96孔板倒数8,7,6,5横排的细胞都死了。不知道我这么说，你是否能听明白？希望你能指点，我郁闷啊，到底怎回事呢
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7楼2011-11-30 09:43:51
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石头影子2002

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 纳米shiny at 2011-11-29 15:20:47:
本人觉得是染菌了，根据楼上所说排除一下染菌的原因

谢谢回复，我同时取了一些细胞培养，今天发现细胞正常。看来不是细胞污染，可能有别的原因了
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8楼2011-11-30 10:07:31
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liyangmiscap

木虫 (著名写手)
石头影子2002(金币+1): 2012-02-16 10:03:05
引用回帖:
6楼: Originally posted by 石头影子2002 at 2011-11-30 09:34:26:
非常感谢你的回复，细胞是UT7悬浮细胞，依赖EPO。我培养的应该正常生长的全部死了，而且做了3次情况都一样。郁闷啊

我只做过贴壁细胞的MTT，对于悬浮细胞不是很熟悉啊，你不加药物，正常培养的细胞加入MTT后也不能正常显色吗？你的MTT没有问题吗？
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9楼2011-11-30 10:55:07
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石头影子2002

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liyangmiscap at 2011-11-30 10:55:07:
我只做过贴壁细胞的MTT，对于悬浮细胞不是很熟悉啊，你不加药物，正常培养的细胞加入MTT后也不能正常显色吗？你的MTT没有问题吗？

有显色的，MTT应该没问题。显色前显微镜下看细胞，正常组的细胞就有死亡迹象了。谢谢你
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10楼2011-11-30 11:02:48
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 石头影子2002 at 2011-11-30 09:43:51:
细胞是UT7细胞，依赖EPO生长，为了检测血清中是否有EPO中和抗体，我孔板上分了几组，空白，正常，阴性血清，阳性血清，待测血清。本来结果应该是空白细胞死亡，正常组细胞生长，阴性血清组细胞正常，阳性因为有浓 ...

如果正常组细胞也死了
那么这个问题就比较不好分析了
也许是体系有问题了
排除了细胞消化和接种的问题了吗
试试排除一下这个因素
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11楼2011-12-01 10:47:07
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石头影子2002

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jhu132llh at 2011-12-01 10:47:07:
如果正常组细胞也死了
那么这个问题就比较不好分析了
也许是体系有问题了
排除了细胞消化和接种的问题了吗
试试排除一下这个因素

细胞液用到最后颜色桃红，会不会是细胞液的问题？
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12楼2011-12-02 11:07:14
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 石头影子2002 at 2011-12-02 11:07:14:
细胞液用到最后颜色桃红，会不会是细胞液的问题？

恩
倒是有可能的
篇碱了点
试试换培养液了吗
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13楼2011-12-03 08:55:49
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石头影子2002

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jhu132llh at 2011-12-03 08:55:49:
恩
倒是有可能的
篇碱了点
试试换培养液了吗

正打算试试，细胞好像也有点老了，所以又重新复苏细胞，到时也试试培养液。谢谢你的关注
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14楼2011-12-05 09:58:34
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