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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教MTT实验96孔板种板密度问题
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2011加油

银虫 (正式写手)

[交流] 请教MTT实验96孔板种板密度问题

MTT实验96孔板种板密度问题：

一、请问大家是通过计数板来先确定细胞密度，再稀释成合适的密度进行种板吗？
若是该情况，种板的密度大概是多少个每毫升？

二、还是根据经验，判断细胞在培养瓶中长到一定程度，就直接种板，不用经过计数板计数来确定细胞密度？
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1楼 2011-06-07 16:15:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wangleimin

木虫 (正式写手)
★
2011加油(金币+1): 谢谢参与
既然你是贴壁细胞，按照说明，理论上10000个每孔（200ul），实际在消化时可能会损伤一些细胞，最好10000以上，
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14楼2013-04-09 16:50:07
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轻涛低语

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
2011加油(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流。经验很丰富啊！ 2011-06-07 23:22:41
2011加油(金币+1): 谢谢啊 2011-06-08 16:39:35
最好是细胞计数啦，但是基本上我们操作中都是凭经验的，就是在培养瓶中长到80%就可以种3块板，但是我们养的是癌细胞，很容易长的
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3楼2011-06-07 21:41:30
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xueshu110 at 2011-06-08 15:16:02:
我们实验室是细胞计数，这是必经环节，至于你说的凭经验种板我不知道，密度一般为10*5/ml。另我查了资料。说对于非粘附细胞，一般浓度为5*103-100*10*3，仅接种100微升于96孔板中。

再问，细胞计数时，你是按照25方格中的5小方格计数，还是按9大方格中的四角方格计数？
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7楼2011-06-08 16:48:35
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若乔西木

银虫 (初入文坛)
★
2011加油(金币+1): 谢谢参与
我也想问你问过的这个问题，我的细胞种板密度为5000/孔，24小时后孔板中的细胞长的并不多，怀疑这个种板密度还是小了
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13楼2013-04-09 15:58:09
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普通回帖

dhd997

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
2011加油(金币+1): 谢谢回帖 2011-06-07 19:59:05
西瓜(金币+2): 鼓励哈 2011-06-07 23:21:55
细胞计数
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2楼2011-06-07 16:51:47
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xueshu110

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
2011加油(金币+1):谢谢参与
2011加油(金币+1): 2011-06-08 16:38:34
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 18:42:03
本帖内容被屏蔽
4楼2011-06-08 15:16:02
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xueshu110 at 2011-06-08 15:16:02:
我们实验室是细胞计数，这是必经环节，至于你说的凭经验种板我不知道，密度一般为10*5/ml。另我查了资料。说对于非粘附细胞，一般浓度为5*103-100*10*3，仅接种100微升于96孔板中。

谢谢啊，我用的细胞也是属于贴壁生长的细胞，之前按6000个每孔接种，发觉阴性对照组的吸光度值很低（0.2多一些），估计是种板密度过小。
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5楼2011-06-08 16:39:13
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 轻涛低语 at 2011-06-07 21:41:30:
最好是细胞计数啦，但是基本上我们操作中都是凭经验的，就是在培养瓶中长到80%就可以种3块板，但是我们养的是癌细胞，很容易长的

凭经验的话，长到80%时，种板密度估计是多少了呢？
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6楼2011-06-08 16:40:41
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xueshu110

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2011-06-08 18:27:46
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xueshu110

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-08 18:42:26
2011加油(金币+1): 非常感谢 2011-06-08 22:10:34
本帖内容被屏蔽
9楼2011-06-08 18:28:18
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蝈_屯

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
2011加油(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): 很有经验 2011-06-27 17:21:08
2011加油(金币+2): 3Q 2011-06-28 20:52:44
一般都要细胞计数的，但是熟练了之后可以根据自己细胞的生长状况决定什么时候种板
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10楼2011-06-26 22:03:21
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紫藤宇宙

新虫 (小有名气)
★
2011加油(金币+1): 谢谢参与
用细胞技术板
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11楼2013-01-01 15:40:23
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约人

金虫 (小有名气)
★
2011加油(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-06-08 16:39:13
谢谢啊，我用的细胞也是属于贴壁生长的细胞，之前按6000个每孔接种，发觉阴性对照组的吸光度值很低（0.2多一些），估计是种板密度过小。...

我们的也是，OD值很小，可能是细胞数太少，后来就加大细胞数到一万了。。
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15楼2013-07-05 10:33:35
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su-b0812楼
2013-01-02 00:46   回复  
zhao永不言弃16楼
2020-09-27 21:15   回复  
2011加油(金币+1): 谢谢参与
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