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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求如何用96孔板做抗菌实验及数据处理问题
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晴天8773

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求如何用96孔板做抗菌实验及数据处理问题

求助各位大侠如何用96孔板做抗菌实验？所得数据如何处理？
本人做法：
1，将0.5浊度的菌悬液，经灭菌的液体培养基1∶1000稀释后，向每孔中加100μl。
2，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的孔板中，第3至第10孔加药液，每孔100μl，其余各列加入相同体积的液体培养基，作为生长对照。酶标仪读数。
3，过夜培养，酶标仪读数。
现在不知道数据怎么处理，也不知道做法是否正确？
请各位大侠赐教。
本人化工专业，对生物一窍不通，求助了，谢谢各位。
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1楼 2010-11-21 22:40:14
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流，还没申请啊？ 2010-11-22 08:29:29
晴天8773(金币+9):谢谢。考虑了孔板的边缘效应，所以每列8个孔加的是相同的浓度，求出每列的均值之后，不知道怎么继续处理了？抗菌率是实验组的均值比上对照组的均值吗？ 2010-11-22 08:51:05
复孔3~5个，求均值
先后重复三次实验，同样得均值
将3次均值再求均值及标准差
方差分析，根据需要作比较

“生长对照”加的是药液的溶剂
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2楼2010-11-21 23:55:41
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晴天8773

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-21 23:55:41:
复孔3~5个，求均值
先后重复三次实验，同样得均值
将3次均值再求均值及标准差
方差分析，根据需要作比较

“生长对照”加的是药液的溶剂

标准差及方差的数值代表什么意思？
加入材料为金黄色。经过灭菌的液体培养基稀释后不同浓度的材料颜色不同，吸光度不同，差别较大。
过夜培养后，每列的吸光度差别变小。
左边六列数据如下：
（一）加入菌悬液、材料测定吸光度（原始数据）：
   1菌悬液 2菌悬液        3材料原液        4稀释2倍        5稀释4倍        6稀释8倍
A   0.298        0.296        0.574        0.462        0.396        0.372
B   0.307        0.295        0.714        0.564        0.503        0.436
C   0.310        0.309        0.542        0.528        0.443        0.413
D   0.301        0.304        0.654        0.559        0.498        0.453
E   0.298        0.296        0.574        0.462        0.396        0.372
F   0.307        0.295        0.714        0.564        0.503        0.436
G   0.310        0.309        0.542        0.528        0.443        0.413
H   0.301        0.304        0.654        0.559        0.498        0.453
（二）过夜培养之后测定吸光度（十二小时）：
   1菌悬液         2菌悬液        3材料原液        4稀释2倍        5稀释4倍        6稀释8倍
A   0.987         0.815        1.064        0.938        0.806        0.738
B   0.984         1.001        1.071        0.939        0.759        0.712
C   1.014         1.035        1.010        0.946        0.828        0.751
D   1.003         1.058        1.129        0.964        0.828        0.750
E   0.991         0.812        1.073        0.947        0.809        0.736
F   0.983         1.008        1.050        0.945        0.775        0.715
G   1.013         1.040        1.019        0.965        0.836        0.759
培养18小时、24小时后分别测定吸光度。
请教大侠，我怎么通过上面的数据求出抗菌率？
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3楼2010-11-22 09:13:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流~ 2010-11-22 11:21:10
晴天8773(金币+8):大侠，能具体说说吗?我的材料是非常均匀的液体，八千转离心不沉淀。大肠杆菌没有离心过，不知道离心时转速在怎么控制，离心后菌群如何收集，请赐教。在线等，谢谢。 2010-11-22 14:42:58
我们暂时抛开什么统计方法不说
首先你的药对吸光度影响就很大了，所以很难下结论了。
你得重新优化你的实验方法，比如测之前离心，收集菌体，去掉培养液，重新加培养基测吸光度
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4楼2010-11-22 11:15:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5):辛苦~ 2010-11-22 17:09:17
晴天8773(金币+8):谢谢，那我还是用培养皿做吧，就是实验的准确度不高。 2010-11-22 18:31:29
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-22 11:15:58:
能具体说说吗?我的材料是非常均匀的液体，八千转离心不沉淀。大肠杆菌没有离心过，不知道离心时转速在怎么控制，离心后菌群如何收集，请赐教。在线等，谢谢。 2010-11-22 14:42:58

材料就算是均匀的液体，也有可能影响吸光度。比浊法一般在OD600那里做吧
你可以看到，在初始时间点，加了材料的原液和稀释液之后，吸光度上升了接近50%，就说明这个材料以及稀释液会对吸光度有很大的影响了。而且不同的稀释倍数，对于吸光度的影响还不一致，这就很难通过扣除的方法来做。除非你用双波长来矫正，不知道能不能有什么改善。

大肠杆菌离心的话，可以试试8000*g~10000*g，弃包含材料的培养基，然后再用等量的培养基重悬均匀去测吸光度

有那种专门的板式离心机的
没有的话就辛苦你一个孔一个孔吸出来做了………………
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5楼2010-11-22 17:08:31
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郑江松

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我也是最近在做这方面的试验啊，没有师兄，全是一人看文献走过来的，你的方法我都用来，多看看文献吧。吸光度是解决不了问题的，样品是有颜色的。
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6楼2011-10-21 19:51:15
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lancylxi

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-22 17:08:31
材料就算是均匀的液体，也有可能影响吸光度。比浊法一般在OD600那里做吧
你可以看到，在初始时间点，加了材料的原液和稀释液之后，吸光度上升了接近50%，就说明这个材料以及稀释液会对吸光度有很大的影响了。而 ...

如果是这样的情况，他可以不可以考虑····先用小试管培养，完了到点了以后一起离心，倒掉含药培养基，加入无药培养基后，吸取200ul菌悬液加到96孔板里面去，然后加入相关试剂反应后，测OD
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7楼2018-08-16 11:06:25
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